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葡萄球菌是引发奶牛乳房炎主要的病原菌之一。随着奶牛养殖业的发展和国内对奶牛疾病防控的重视,奶牛乳房炎防控水平提高,致病菌种类和优势菌群发生了一定变化。凝固酶阴性葡萄球菌(coagulase negative staphylococcus,CNS)引起的隐性乳房炎正处于上升趋势,在国内外均有大量的报道,而且一些研究发现由该菌造成的乳房炎常发生于饲养管理好的牛场。近年来,该菌也逐渐引起国内兽医领域的重视。为了调查甘肃省2个奶牛场隐性乳房炎病例中CNS的感染情况,以及这些分离菌的耐药性特征,我们主要做了以下研究:1.采用兰州隐性乳房炎诊断液(LMT)对甘肃省周边2个规模奶牛场的奶牛进行筛查,选择LMT筛查结果为强阳性(+++)的奶牛乳区,共采集乳样58份。采用细菌分离、革兰染色、接触酶试验、血浆凝固酶试验等方法,分离获得36株凝固酶阴性葡萄球菌。然后通过16 S rDNA测序和在线Blast软件分析,确定分离的36株CNS为8个种别,分别为施氏葡萄球菌、溶血葡萄球菌、松鼠葡萄球菌、表皮葡萄球菌、路邓葡萄球菌、沃氏葡萄球菌、木糖葡萄球菌、模仿葡萄球菌,分离率分别为47.22%、25.00%、13.88%、2.77%、2.77%、2.77%、2.77%、2.77%。结果表明,引起甘肃省这2个奶牛场奶牛隐性乳房炎的CNS主要为施氏葡萄球菌、溶血葡萄球和松鼠葡萄球菌。2.选择20种抗菌药物,采用K-B法对36株CNS进行药物敏感性试验,结果表明,36株分离菌表现出一定的耐药表型,对青霉素、夫西地酸、克林霉素、庆大霉素、四环素、红霉素、阿莫西林的耐药率分别为30.56%、19.44%、13.88%、13.88%、11.11%、11.11%、8.3%,对头孢西丁、苯唑西林、头孢吡肟、利福平、万古霉素、利奈唑胺、呋喃妥因等药物敏感。其中17株施氏葡萄球菌对青霉素、四环素、阿莫西林、克林霉素的耐药率分别为23.52%、23.52%、11.76%、11.76%;9株溶血葡萄球菌对环丙沙星、青霉素、庆大霉素、阿莫西林的耐药率分别为44.44%、33.33%、33.33%、11.11%;松鼠葡萄球菌对夫西地酸、克林霉素、庆大霉素的耐药率分别为100.00%、40.00%、20.00%。进一步检测36株CNS携带的耐药基因,结果显示,36株凝固酶阴性葡萄球菌对blaZ的耐药基因检出率为63.88%、rpoB的耐药检出率为55.55%、aacA-aphD的耐药基因检出率为19.44%、ermA ermB ermC的耐药基因检出率分别为0.00%、5.55%、16.66%,vanA的耐药检出率为5.55%,fusB和tetK、tetM、耐药基因的检出率均为0.00%。其中在17株施氏葡萄球菌中fusB、bla Z、ermB和ermC、vanA的阳性检出率分别为88.23%、58.82%、11.76%和29.41%、5.28%,在9株溶血葡萄球菌中blaZ、vanA、ermC和的阳性检出率分别为66.66%、66.66%、11.11%,松鼠葡萄球菌中rpoB、blaZ、aacA-aphD的阳性检出率分别为80.00%、40.00%、40.00%。结果表明,具有耐药表型特征的CNS不一定携带相关耐药基因,携带相关耐药基因的菌株不一定表现相关的耐药表型。