转轮虫的生活史特征及热休克蛋白表达特征研究

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蛭态类轮虫是淡水浮游动物的重要组成部分之一,是迄今发现营专性孤雌生殖且含种类最多的后生动物类群。蛭态类轮虫分布广泛,种内谱系分化明显,具有极高的潜在遗传多样性。本研究采用单个体培养方法,通过生命表技术比较研究了转轮虫(Rotaria rotatoria)三个进化种的生活史特征在不同温度下的差异;同时运用western blot方法,探究了转轮虫热休克蛋白HSP70在热激条件下的表达特征。主要的研究内容和结果如下:1、选择三个转轮虫克隆(HX4、HX8和HX19)作为三个同域进化种的代表,采用生命表技术,来探究温度(24、28和32℃)对其生活史特征的影响。结果表明,三个进化种的生命表参数对温度的升高,产生了不同的响应。进化种,温度,以及它们的交互作用显著影响了所有的生活史参数,除了进化种对生殖后期历时和平均寿命无显著影响,以及进化种和温度的交互作用对生殖后期历时、后代产量和净繁殖率无显著影响。温度对所有的生活史参数均有显著影响。对于进化种HX4,生殖前期、生殖期、生殖后期、平均寿命、产幼体量、生命期望以及世代时间随着温度的升高而显著缩短或减少。相反,它的内禀增长率随着温度的升高而增高。对于进化种HX8,生殖前期、生殖期、生殖后期、平均寿命、生命期望以及世代时间在24℃下最长,而内禀增长率和特定年龄繁殖率最低。对于进化种HX19,生殖后期、平均寿命和生命期望随着温度的升高而显著缩短,而净繁殖率、世代时间和特定年龄繁殖率在三个温度下并无显著差异。无论哪个进化种,随着温度的升高,它们的特定年龄存活率下降的时间提前,且下降的速度更快;特定年龄存活率曲线下降最慢的是24℃下的HX8,下降最快的则是32℃下的HX4。随着温度的升高,特定年龄繁殖率曲线的高峰也出现得更早,无论哪个进化种,在32℃下的峰值出现得最早,而在24℃下出现得最晚。这三个潜在的转轮虫隐种采取可变的生活史策略,即在低温下采取低繁殖率、高存活率的策略,而在高温下采取高繁殖率、低存活率的策略。三者对水温相似的适应能力也解释了它们在亚热带浅水湖中共存的原因。2、运用western blot方法,研究了转轮虫热休克蛋白HSP70在不同热激条件下表达水平的变化情况。(1)检测转轮虫在不同热激时间后HSP70的表达水平,发现未经热激处理的对照组转轮虫,HSP70表达量很低。经过40℃的热激处理之后,HSP70表达量明显上升,并且随着热激时间的加长,热休克蛋白的表达量也逐步升高。(2)检测转轮虫在不同应激温度下HSP70的表达水平,发现不仅40℃的高温刺激会引起转轮虫HSP70表达量的增高,16℃的低温刺激同样会引起HSP70表达量的增高,高低温应激后的HSP70表达量与对照组之间均有显著差异。(3)检测经热激处理后的转轮虫在重新置于原培养温度并经历不同恢复时间后HSP70的表达水平,发现转轮虫在受到热激后HSP70表达水平迅速上升,并在刺激消除后短时间内仍继续上升,至12小时左右表达水平达到高峰,之后逐渐下降。综上可见,温度的变化可以引起转轮虫HSP70表达水平的升高,并且表达水平与刺激强度呈正相关;高温胁迫和低温胁迫均能引起转轮虫HSP70表达水平的升高,并且高温和低温对转轮虫具有相似的刺激强度;转轮虫HSP70的表达过程迅速而短暂,在受到刺激之后HSP70开始迅速表达并在短时间内达到高峰,之后逐渐降低并恢复至正常水平。HSP70的表达可以维持细胞结构和功能的稳定,使转轮虫具有更强的热耐受能力。当转轮虫的生存环境发生变化时,例如温度的波动,可以通过调节热休克蛋白的表达来适应环境。
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