基于核酸扩增的分子诊断技术在重大传染性疫情防治、癌症筛查、遗传性疾病诊断等领域发挥着重要的作用。常规的核酸检测方法为聚合酶链式反应,该技术检测时间长、精准的温度控制且需特殊仪器及专业技术人员操作。为解决传统扩增检测中存在的不足与问题,本文基于微流控技术,利用环介导等温扩增方法对非小细胞肺癌细胞的常见突变位点进行特异性检测。论文的主要研究内容如下:建立了一种基于dLAMP的微流控数字化核酸检测平台,并将其成功应用于非小细胞肺癌细胞NCI-H1975的突变筛查。首先基于软光刻技术,设计含有多个平行阵列的微流控芯片,通过PDMS改性及负压处理,实现了样本和试剂100%的进样量及快速载入。“三明治”结构的设计减少了扩增过程中试剂的蒸发。其次,优化了影响LAMP反应的各因素,比如甜菜碱、引物浓度、染料浓度等,在其最佳反应条件下,成功实现了NCI-H1975突变位点的特异性筛查,检测限为单个细胞拷贝数。最后利用该芯片与q PCR技术对未知样本测试并进行结果比较,检测灵敏度更高。建立了一种基于dLAMP的数字化单细胞阵列核酸分析平台。采用亲疏水微阵列通过限制性稀释的方法构建数字化单细胞阵列,并对形成的单细胞阵列进行了验证和评价,进一步优化了影响LAMP扩增的各因素,成功实现了对不同混合比例的MC38和NCI-H1975细胞样本中EGFR L858R突变基因的特异性筛查。为了提高该方法的稳定性与重现性,本文进一步提出2种单细胞阵列的构建方法:一种是基于细胞尺寸捕获的SU-8微井阵列,该方法单细胞捕获效率高达62.15%,重复性好,但扩增体系太小无法进行后续的扩增反应;另一种是基于液滴大小的双层捕获阵列,分别通过下层微井结构捕获单细胞,上层“倒八”结构捕获大液滴,扩大了反应体系且液滴捕获率接近100%。本文对三种形成数字化单细胞阵列的方法进行了比较分析,为进一步单细胞核酸检测奠定基础。