椭圆叶米仔兰Aglaia elliptifolia Merr.是楝科Meliaceae.米仔兰属Aglaia.芸香目Rutal es.的一种常绿灌木或小乔木。近年来椭圆叶米仔兰被报道含有双酰胺、四环三萜、黄酮类等多种类型化合物,部分类型化合物还具有显著的抗炎、抗肿瘤等作用。本次实验研究椭圆叶米仔兰中的化学成分及其生物活性,不仅可以对椭圆叶米仔兰的资源进行开发和利用,并且能为某些药用指导提供科学依据。通过对椭圆叶米仔兰中提取分离所得的20个单体化合物进行体外抗菌、抗肿瘤活性筛选,重点研究了化合物11对HCT-116细胞的机制探讨。目的:以椭圆叶米仔兰为研究目标,利用多种色谱分离手段和现代波谱解析技术进行结构鉴定,得到的单体化合物,即丰富了椭圆叶米仔兰植物的化合物库,同时通过对这20个单体化合物生物活性筛选寻找椭圆叶米仔兰中新的活性成分,为椭圆叶米仔兰的进一步开发和利用提供一定的科学依据。方法:(1)通过硅胶柱色谱、ODS柱色谱和半制备HPLC等多种方法进行分离纯化,用1H-NMR、13C-NMR、ESI-MS等方法解析鉴定化合物,确定其椭圆叶米仔兰化合物的结构。(2)椭圆叶米仔兰20个单体化合物对金黄色葡萄球菌的研究。(3)椭圆叶米仔兰20个单体化合物体外抗肿瘤活性的研究:对A549(人肺腺癌细胞株),HL-60(人髓细胞白血病细胞株),HT-29(人结肠癌细胞株),HCT-116(人结肠癌细胞株),MD A-MB-231(人乳腺癌细胞株),K562(人慢性髓系白血病细胞株)等肿瘤细胞增殖抑制作用,同时对比HL-7702(人正常肝细胞株)的作用考察其选择性作用。对筛选所得的优势化合物11进行深入研究,通过流式细胞术检测MDC染色、免疫荧光法检测LC3B,分析化合物11对HCT-116细胞自噬的作用;Western Blot检测化合物11对HCT-116细胞内LC3B、p62、PINK1、Parkin、LAMP1、TOMM20等蛋白表达的影响。结果:(1)通过各种分离鉴定等方法从椭圆叶米仔兰中分离得到了20个单体化合物,且这20个单体化合物均是种首分。分别鉴定为胡萝卜苷(1),β-谷甾醇-3-O-6-棕榈酰葡萄糖苷(2),(+)-儿茶素(3),表儿茶素(4),Lyratol F(5),3-羟基-1-(4-羟基-3,5-二甲氧基苯基)-1-丙酮(6),β-谷甾醇(7),育亨宾(8),α-棕榈精(9),4-(氨甲基)-2-苄基-5-(乙氨基)哒嗪酮-3(2H)(10),表没食子儿茶素(E GC)(11),gallocatechin-(4’-O-7)-epigallocatechin(12),(-)-南烛木树脂酚-3α-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(13),(+)-异落叶松脂素-9’-O-β-吡喃葡萄糖苷(14),(6S,7S,8R)-7α-[β-D-glucopyranosyl)oxy]isolariciresinol(15),原花青素B3(16),(2R,3S)-5,7,3’-tri-Omethyl-(-)-epicatechin(17),原花青素B1(18),原花青素B2(19),(±)-6-linalyl-7-hydroxycoumarin(20)。(2)对椭圆叶米仔兰提取分离的20个单体化合物进行了金黄色葡萄球菌的抗菌活性筛选,实验结果表明:化合物4,11,12,16,18,19表现出较好的抑菌活性,最低抑菌浓度(MIC)分别是1.0 mg/m L,1.0mg/m L,1.0 mg/m L,1.0 mg/m L,1.0 mg/m L,0.8 mg/m L。(3)对椭圆叶米仔兰提取分离的20个单体化合物进行了MTT法检测对肿瘤细胞的增殖抑制作用。实验结果表明:有细胞增殖抑制作用的化合物为6,11,12,13,18,19,20,它们对七种细胞株表现出不同的细胞毒性。(4)通过对20个单体化合物抗肿瘤的活性初步筛选,与HL-7702正常肝细胞株相比和分得的化合物量,结果表明化合物11对HCT-116细胞作用最佳。因此化合物11进一步用流式细胞术分析MDC染色,结果表明化合物11可呈剂量依赖性增加细胞自噬比率,与对照组比较,具有统计学意义(P<0.05)。LC3B染色结果进一步表明化合物11可促进HCT-116细胞内的LC3B阳性比例显著增加,提示自噬增加,其作用具有浓度依赖性,与对照组比较,具有统计学意义(P<0.05)。Western Blot检测自噬的相关蛋白表达的变化,结果表明化合物11可促进LC3B、PINK1、Parkin、LAMP1等蛋白表达,抑制p62、TOMM20蛋白表达,提示其可能通过调节PINK1/Parkin线粒体自噬信号通路促进HCT-116细胞发生自噬,导致肿瘤细胞死亡。