论文部分内容阅读
普洱茶(Pu-erh Tea)源于我国云南省普洱市,是一类历史悠久的特种茶品,具有味道醇厚、陈香扑鼻的特点,深受全世界的喜爱。研究表明普洱茶具有多种药理功效,如抗氧化、降血脂、降血糖等。其中,普洱茶的降血糖作用受到广泛的认可,市场上涌现出大量以普洱茶为原料制成的降血糖保健食品。有文献报道普洱茶中的降血糖活性成分主要包括茶多糖和茶褐素,但因二者难以分离,致使普洱茶中的有效成分并不明确。为此,本论文研究普洱茶中茶多糖和茶褐素的分离纯化,初步分析了各个成分的结构特征,并研究了它们对棕榈酸诱导的胰岛p细胞(INS-1)毒性的保护作用,以期为普洱茶降血糖保健食品的开发和应用提供理论数据,研究结果如下：通过沸水煮提、70%乙醇沉淀、常规干燥得到普洱茶总糖TPPS,收率为25.4%,总糖含量为42.5%,糖醛酸含量为30.9%。紫外扫描结果显示TPPS中还含有一些色素,色素种类为茶褐素。探索几种分离茶多糖和茶褐素的方法,最终选用DEAE-纤维素柱层析。将TPPS上样于DEAE-纤维素,分别以蒸馏水、0.5MNaCl和0.5MNaOH水溶液洗脱,得到中性多糖PPS-N、酸性多糖PPS-A和茶褐素TB,产率分别为1.4%、20.3%和40%。PPS-N和PPS-A的糖含量分别为66.9%和50.3%。通过苯酚硫酸法检测TB,发现TB中含有多糖成分,糖含量为31.8%。采用高效液相色谱法(HPLC)分析其单糖组成,结果显示PPS-N的单糖组成为Gal (72.5%)、Ara (10.2%)、Glc(8.8%)、Man (4%)、 Rha (3.4%)和GalA (0.9%); PPS-A的单糖组成为GalA (40.4%)、Gal (27.2%)、 Ara (15.6%)、Rha (6.4%)、Man (5.9%)、Glc (2.8%)和GlcA (1.7%); TB的单糖组成为Gal (24.2%)、Ara (21.4%)、GalA (20.1%)、Glc (11.8%)、Rha (10.3%)、Man(9.8%)和Xyl(4.0%)。从单糖组成结果推测PPS-N中可能含有大量的半乳聚糖和少量的阿拉伯半乳聚糖(AG)或阿拉伯聚糖；PPS-A中含有AG、聚半乳糖醛酸(HG)和少量的Ⅰ型聚鼠李半乳糖醛酸(RG-1); TB中的多糖部分可能含有AG、RG-Ⅰ和少量葡聚糖。通过DEAE-纤维素对酸性多糖PPS-A进行进一步的分级。分别以0.2、0.33和0.5M的NaCl水溶液洗脱,得到相应的三个级分PPS-A1、PPS-A2和PPS-A3,得率分别为26.4%、28.8%和16.8%。经测定,PPS-A1的单糖组成为GalA (35.4%), Gal (29.2%)、Ara (13.4%)、Man (9.8%)、Rha (6.2%)、Glc (3.6%)和GlcA (2.4%); PPS-A2为GalA (62.5%)、Rha (12.6%)、Ara (11.3%)、Gal (11.1%)、Man (2.6%)和Xyl (4%); PPS-A3为GalA (61.8%)、Rha (15.2%)、Gal (14.7%)、Man (5.4%)和Glc(2.9%)。根据单糖组成结果,推测PPS-A1中含有HG和AG结构,PPS-A2和PPS-A3含有大量的HG结构,其中A2级分还可能含有AG结构。检测普洱茶多糖和TB对棕榈酸诱导的胰岛β细胞则S-1毒性的保护作用,以及对INS-1增殖的影响,结果发现酸性糖PPS-A的活性最强。此外,细胞增殖结果表明,酸性糖各亚级分的活性强度关系为PPS-A2≥A3>A1。通过以上实验结果发现,普洱茶中具有脂毒性保护作用的成分是酸性茶多糖,且保护作用可能与其促进细胞增殖相关。根据单糖组成结果初步推测其活性成分的结构特征是以HG为主。