论文部分内容阅读
目的研究宫颈癌及癌前病变组织中人乳头瘤病毒16型(HPV16)E7基因含量、人白细胞抗原Ⅰ类分子(HLA-Ⅰ)表达与宫颈疾病恶性进展三者间的相关关系,并探讨HPV16E7可能的致癌机制。方法1.实时荧光定量测定HPV16 E7基因:提取467例山东妇女宫颈各级病变组织DNA,以人乳头瘤病毒16型(HPV16)E7基因作为扩增的靶基因,同时以人β—肌动蛋白基因片段作为内参照,借助于设计的目的基因引物及特异性荧光探针,建立各自的标准曲线,用实时荧光定量聚合酶链反应(RFQ-PCR)同时扩增两个基因片段。为消除标本间在DNA提取和产量方面存在的差异,以E7和β-肌动蛋白的含量比值(CE/Cβ,即单位细胞内HPV16E7含量)作为评价组织所含HPV16E7 DNA载量的指标。2.免疫组化S-P染色:石蜡切片经二甲苯常规脱蜡,梯度酒精水化后入枸橼酸盐修复液,98℃热修复15 min;冰冻切片室温干燥后入冰丙酮固定10 min。经上述预处理后,所有切片按试剂盒说明进行免疫组化染色以测定HLA-Ⅰ类分子表达情况。用PBS缓冲液代替一抗作阴性对照;用以前实验中宫颈炎阳性标本作阳性对照,正常淋巴细胞作内参照。结果1.在β—肌动蛋白阳性的宫颈各级病变组织中,HPV16E7含量(中位数)在宫颈鳞癌组最高(2453拷贝/细胞),其次分别为宫颈上皮内瘤变(CIN)组(44.96拷贝/细胞)、宫颈腺癌组(18.6拷贝/细胞)及宫颈炎组(0拷贝/细胞);其中宫颈癌组与宫颈炎组、宫颈癌组与CIN组、CIN组与宫颈炎组间HPV16E7含量差异有显著性意义,P值均<0.001。HPV16E7含量随病情加重(从宫颈炎到宫颈癌)呈上升趋势,二者呈显著正相关,相关系数为0.848(P<0.001)。2.HPV16E7阳性率在宫颈鳞癌组、宫颈腺癌组、宫颈上皮内瘤变(CIN)组和宫颈炎组分别为98.3%、22.6%、78.8%、10.5%。病毒阳性率在鳞癌组与宫颈炎组、CIN组与宫颈炎组、腺癌组与宫颈炎组、鳞癌组与宫颈腺癌组、鳞癌组与CIN组、CIN组与腺癌组差异有统计学意义(P<0.001)。3.HLA-Ⅰ类分子表达率随宫颈病变程度进行性下降,相关系数为0.434(P<0.001)。HLA-Ⅰ类分子阳性率在鳞癌组与宫颈炎组、CIN组与宫颈炎组、腺癌组与宫颈炎组、腺癌组与鳞癌组、鳞癌组与CIN组、腺癌组与CIN组差异有统计学意义(P<0.001)。4.宫颈癌及癌前病变组织中HPV16病毒感染与HLA-Ⅰ类抗原缺失高度相关,相关系数为-0.475(P<0.001)。结论1.宫颈组织中HPV16E7病毒含量与宫颈损伤严重程度呈显著正相关,HLA-Ⅰ类抗原表达率随宫颈病变程度进行性下降。2.HPV16E7在宫颈各级病变组织HLA-Ⅰ类抗原缺失中起重要作用,从而使得HPV逃避机体细胞免疫。3.建立的RFQ-PCR检测宫颈不同病变组织HPV16 E7基因的方法,可用于宫颈癌患者的筛查及风险评估。