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目的:阿尔茨海默病(Alzheimers disease，AD)的病理特征主要表现为大脑特定区域神经元退行性病变，尤其在海马、大脑皮层等区域。其临床表现主要是从初期的学习记忆障碍，认知功能障碍，到晚期的痴呆症候群。虽然关于AD的发病机制存在诸多假说，如胆碱能神经元假说、Aβ毒性假说、Tau蛋白假说、胰岛素假说、自由基损伤假说、基因变异假说等，但是其具体致病机制尚未完全研究清楚。近年来，大量研究表明基因异常甲基化与AD紧密相关，如早发性家族性阿尔茨海默病(early-onset familial Alzheimersdisease，FAD)中存在早老素(Presenilins)基因及淀粉样前体蛋白(APP)基因的甲基化异常，是其FAD早期发病的原因之一。presenilin-1/presenilin-2(PS1/PS2)基因可编码高度同源的跨膜蛋白γ-分泌酶，该酶参与淀粉样前体蛋白(amyloid precursor protein，APP)合成后加工及转运，从而影响β淀粉样蛋白(amyloid peptide，Aβ)的形成，其变异可加速Aβ的产生和沉积，而Aβ的过量产生和积聚可导致神经元轴突的损伤及神经死亡，从而引起AD发生。在晚发散发性阿尔茨海默病(late-onset Alzheimers disease，LOAD)中也发现如TMEM59和SORL1基因启动子区域及Apoe基因存在异常甲基化改变的现象。为探讨是否还存在其它甲基化异常基因参与到AD，尤其是早期AD的发病机制中，本实验首先繁育及筛选出阿尔茨海默病小鼠模型，即条件性presenilin-1/presenilin-2双基因敲除小鼠(dKO mice)，作为本研究的实验目的鼠，该小鼠7月龄时表现出类似于早期AD的部分神经退行性病变，如轻度皮质萎缩、神经元凋亡及tau-蛋白磷酸化以及轻度认知功能障碍等，符合早期AD动物模型的要求;然后再通过基因测序技术分析早期AD海马组织中DNA甲基化变化情况，以获取更多的与早期AD相关的甲基化异常基因。 方法:选取野生型及PS1/PS2双基因敲除同系小鼠进行饲养并繁殖，再将子代杂合子小鼠进行交配，并通过提取子代小鼠鼠尾基因组DNA，采用PCR法和琼脂糖凝胶电泳鉴定基因类型。实验分别选取3只7月龄dKO mice及3只7月龄野生型小鼠，提取海马组织基因组DNA，运用简化的表观亚硫酸盐测序技术（Reduced Representation Bisulphite Sequencing，RRBS）检测基因组DNA异常甲基化分布及类型，利用相关生物软件对照分析以获得异常甲基化基因，并进行在线功能分析。 结果:本实验成功饲养和繁殖PS1/PS2双基因敲除早期阿尔茨海默病模型小鼠。利用Bismark(vO.7.4)软件与野生小鼠参考基因组序列进行比对，运用DAVID在线分析网站进行功能基因的GO与KEGG功能分析及差异甲基化区域(DMR)分析，获得30个甲基化异常基因，在不同的染色体上分析获得异常甲基化位点1338个，涉及873个基因。 结论:使用正确的饲养繁育以及鉴定方法是获得PS1/PS2双基因敲除小鼠的有效途径。本实验通过RRBS成功挑选出早期AD鼠模型甲基化异常基因，为今后建立早、中、晚各期AD的DNA甲基化图谱以及获得甲基化致病基因奠定基础，也为更深入地探索AD的发病机制，以及制定预防、早期诊断及治疗方案提供重要的参考依据。