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戊型肝炎病毒(hepatitis E virus,HEV),是一种经肠道传播,严重危害人类健康的病毒性肝炎病原体。然而,HEV与宿主之间的关系还不是很清楚。锌指抗病毒蛋白ZAP是一种宿主限制因子,它能特异地结合病毒基因组上的ZRE区,通过招募宿主的内切酶对病毒基因组进行切割,从而达到抗病毒的作用。ZAP属于干扰素刺激基因ISG的一员,受病毒和干扰素刺激显著上调。而目前对于ZAP与HEV的关系尚未有较明确的研究。本研究的主要工作是探究ZAP对HEV复制的影响,以及对其作用机制的初步研究,主要包括4个部分:1、HEV在复制周期中调控ZAPZAP是干扰素刺激基因ISG的一员,为了探究HEV是否对ZAP的表达具有调控作用,我们对HEV急性感染者的血清中的ZAP进行检测,HEV未感染者作为对照。结果显示,在HEV急性感染者中ZAP被显著抑制,同时,IFN-β也被显著抑制。为了探究HEV对ZAP的调控是否与其复制周期相关,我们将HEVRNA转染A549细胞,不同时间点收集细胞。结果显示,HEV在感染细胞的4h抑制ZAP,而在HEV感染细胞后的12-120h,ZAP受宿主天然免疫调控显著上调。2、ZAP有效抑制HEV复制病毒与宿主的相互作用是研究病毒致病机制的一大热点。为了探究ZAP对HEV复制的影响,我们对A549细胞进行ZAP过表达后,转染HEVRNA。结果显示,ZAP过表达有效抑制HEV复制。为了进一步验证ZAP对HEV复制的影响,我们对A549细胞进行ZAP敲低后,转染HEVRNA。结果显示,ZAP敲低,HEV复制升高。为了找到ZAP在HEV上的特异结合区域ZRE,我们构建了 pMIR-Report-HEV-5’荧光素酶报告基因载体和pMIR-Report-HEV-3’荧光素酶报告基因载体,将 pMIR-Report-HEV-5’-luc 和 pMIR-Report-HEV-3’-luc与ZAP共转。结果显示,ZAP能够显著抑制pMIR-Report-HEV-5’-luc的荧光素酶活性。3、ZAP协同IFN-β抑制HEV复制天然免疫是细胞抵抗病原体入侵的第一道防线,宿主通过识别病毒的复制中间体dsRNA,激活IRF3的磷酸化,合成大量I型干扰素,从而消灭入侵的病原体。ZAP作为ISG基因的一员,为了探究ZAP是否参与了 IFN-p抑制HEV复制的过程,分别设置A549细胞转染HEV RNA组;转染HEV RNA后再转染ZAP-shRNA;共转HEV RNA和poly(I:C);共转HEVRNA和poly(I:C)后转染ZAP-shRNA。结果显示,ZAP敲低,HEV复制上升;poly(I:C)能够刺激宿主产生抑制HEV复制的能力;ZAP敲低削弱了 poly(I:C)刺激宿主产生的对HEV复制的抑制能力。4、在动物模型中探究ZAP对HEV复制的影响前期实验,我们发现HEV侵染宿主后,ZAP随病毒复制的进行在宿主细胞内呈显著上调的趋势。而过表达ZAP能够有效抑制HEV的复制,敲低ZAP会削弱poly(I:C)刺激宿主产生的对HEV复制的抑制能力。为了进一步探究是否在体内环境中ZAP仍能够有效抑制HEV的复制,我们对BALB/c小鼠进行过表达ZAP,24h后实验性感染HEV。结果发现,在小鼠血清和肝脏中,HEV感染刺激小鼠体内ZAP上调,而过表达ZAP能够有效抑制HEV的复制,抑制效果随ZAP浓度梯度升高而增强。本论文发现,HEV在急性感染期有效抑制ZAP的表达,而ZAP特异结合HEV 5’-UTR抑制HEV的复制。ZAP协同IFN-β抑制HEV的复制。在BALB/c小鼠中过表达ZAP呈浓度梯度抑制HEV复制。