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第一部分:更具侵袭转移能力的人肝癌细胞的筛选目的:体外筛选出更具侵袭转移能力的肝癌MHCC97-C细胞系,探讨uPA系统在肝癌细胞系中的表达及其在侵袭转移中的作用。方法:使用Transwell小室对MHCC97细胞系进行筛选,筛选出更具侵袭转移能力的肝癌细胞,命名为MHCC97-C细胞系;MTT法检测MHCC97-C细胞系与MHCC97细胞系30min、1h、2h时粘附细胞的OD值;使用Transwell小室检测两组细胞48小时的透膜细胞数;免疫组化检测肝癌MHCC97-C细胞系与MHCC97细胞系uPA、uPAR的表达。结果:MHCC97-C细胞系与MHCC97细胞系相比,两组细胞的OD值,在30min时无显著性差异(P=0.071);1h、2h时有显著性差异(P<0.05);两组细胞48小时的透膜细胞数相比,有显著性差异(P<0.01);两组uPA的表达有显著性差异(P<0.01);uPAR蛋白的表达有显著性差异(P<0.01)。结论:通过体外筛选更具侵袭转移能力的肝癌细胞是可行的,uPA系统在肝癌的侵袭转移中发挥着重要作用。第二部分:uPA合成抑制剂阿米洛利(amilorde)在体外对肝癌MHCC97-C细胞系的抑制作用目的:研究uPA合成抑制剂阿米洛利在体外对MHCC97-C细胞系粘附性、侵袭转移能力的影响。方法:MTT法检测MHCC97-C细胞系0.2μmol/ml阿米洛利组与空白对照组的30min、1h、2h时粘附细胞的OD值;使用Transwell小室检测MHCC97-C细胞系在不同浓度的阿米洛利(0μmol/ml、0.1μmol/ml、0.15μmol/ml、0.2μmol/ml、0.25μmol/ml)作用后,48小时透膜细胞数。结果:空白对照组与各不同药物浓度加药组相比,两组细胞30min、1h、2h时粘附细胞的OD值有显著性差异(P<0.01);空白对照组与各不同浓度药物组比较48小时透膜细胞数有显著性差异(P<0.01);加药组中,0.2μmol/ml组与0.25μmol/ml组,两组无显著性差异(P=0.831);其余各加药组间有显著性差异(P<0.01)。结论:阿米洛利有明显抑制人肝癌细胞系MHCC97-C粘附力、侵袭转移的能力,阿米洛利的最适作用浓度为0.2μmol/ml。更高的药物浓度不能使抑制细胞的粘附性、侵袭转移能力进一步增强。