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目的培养针对髓鞘碱性蛋白(MBP)特异的SD大鼠T淋巴细胞,对其表型和细胞因子分泌特征进行鉴定。制备脊髓损伤(SCI)的大鼠模型并采集SCI前后不同时间点大鼠外周血并检测其表型特征,从而了解T淋巴细胞在SCI病理过程不同时期,亚群数量和免疫活性的变化规律。方法MBP免疫SD大鼠,收集回流淋巴结,制备成单细胞悬液,在RMPI 1640(?)养液中用MBP反复刺激获得MBP特异性T细胞(MBP-T),然后,用3H-胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)掺入法测定其对MBP刺激的反应性,用流式细胞术鉴定其表型和细胞因子的产生。利用重物坠落建立SCI大鼠模型,在脊髓损伤前及损伤后的第2天、第4天、第7天、第14天、第21天自大鼠尾部抽取外周血,应用流式细胞术检测其表型,通过分析得出T淋巴细胞表型、亚群数量及活性在脊髓损伤过程中的变化。结果 当MBP抗原存在的情况下,MBP-T的3H-TdR掺入量明显增加。流式细胞术检测表明MBP-T主要为CD3+CD4+的T淋巴细胞(98%),并可以产生干扰素γ(IFN-γ)和白细胞介素10(IL-10)等细胞因子。在SCI后CD3+T细胞、CD4+T细胞、CD8+T细胞均降低(P<0.05),其中CD3+T细胞与CD4+T细胞在第7天恢复至SCI前水平；CD8+T细胞在第14天恢复至SCI前水平。CD4+/CD8+比值在第4天升高(P<0.05),第21天降低(P<0.05):CD4+CD25 highTreg细胞在第2天显著增高(P<0.01),第4天及以后都显著降低(P<0.01):CD8+CD28+T田胞在第2天和第4天降低(P<0.05,P<0.01),第7天恢复到SCI前水平,第21天明显升高超过SCI前水平(P<0.01):CD8+CD28-细胞在SCI后的前7天明显降低(P<0.05),第14天恢复至SCI前水平。结论 (1)MBP免疫的SD大鼠回流淋巴结细胞,经过体外扩增可以获得MBP特异性的T细胞,其表型主要为CD3+CD4+,并可以产生Thl和Tr1型细胞因子;(2)脊髓损伤可能造成机体细胞免疫和非特异性免疫功能的抑制,引起免疫功能降低;(3) CD4+CD25highTreg细胞可能是引起脊髓损伤后大鼠外周血中T淋巴细胞、CD4+T细胞以及CD8+T细胞降低的重要因素;(4)SCI后免疫炎症细胞及其释放的细胞因子对CD8+T细胞的抑制作用强于对CD4+T细胞的抑制;(5)SCI后外周血中的CD8+CD28+T细胞和CD8+CD28T细胞均降低,可导致免疫监视功能受损以及对病毒、肿瘤细胞等外来型抗原清除能力的下降。