合欢花活性成分的分析及其与藤合欢镇静催眠作用药效的比较

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目的研究合欢花中黄酮类化合物的高效液相色谱分析方法和合欢花中总黄酮的提取工艺。分析合欢花的活性成分及比较合欢花与藤合欢镇静催眠作用药效。从行为学和病理形态学等方面探讨合欢花和藤合欢对失眠大鼠大脑皮质区神经细胞的影响及作用机制。方法建立高效液相色谱法同时测定合欢花中槲皮苷、异槲皮苷和槲皮素等三种黄酮类含量的方法。采用单因素试验和正交实验优化合欢花总黄酮的提取工艺,以确定合欢花总黄酮的最佳提取工艺。药效学主要分行为学和组织学两个方面,行为学部分采用合欢花与藤合欢各提取部位对小鼠自主活动次数、对戊巴比妥钠所致睡眠的影响进行比较,组织学方面则是采用常规HE染色和免疫组化染色以观察合欢花与藤合欢的石油醚、乙酸乙酯、正丁醇提取部位对失眠大鼠的大脑皮质区神经细胞形态的影响及对5-HT和GABA阳性表达的影响。结果异槲皮苷在7.12~356μg·mL-1(r=0.9998,n=6),槲皮苷在12.12~606μg·mL-1(r=0.9998,n=6),槲皮素在5.28~264μg·mL-1(r=0.9997,n=6)范围内峰面积与浓度呈良好的线性关系。合欢花总黄酮提取率的影响因素依次为回流温度>乙醇浓度>料液比>回流时间,且最佳提取方案为90%的乙醇浓度,料液比为1:25,回流提取时间为1h,回流温度为90℃。在此条件下得到的合欢花总黄酮提取率为2.41%。合欢花的乙酸乙酯组和正丁醇组显著减少小鼠的自主活动次数、增加阈下剂量戊巴比妥钠所致小鼠睡眠只数、协同阈剂量戊巴比妥钠延长小鼠的睡眠时间。光镜下观察神经细胞结构变化可见,合欢花的乙酸乙酯组和正丁醇组明显小于模型组,且与空白组差异不大。免疫组化结果显示,同模型组相比,合欢花的乙酸乙酯组和正丁醇组5-HT、GABA的表达显著增加。其他给药组与模型组差异不显著。结论建立了高效液相色谱法同时测定合欢花中槲皮苷、异槲皮苷和槲皮素等三种黄酮类含量的方法,方法灵敏度高,结果准确,重现性好。研究显示提取合欢花的有效成分总黄酮的最佳方案是料液比为1:25,用90%乙醇浸泡24h,回流温度为90℃,回流提取时间为1h,黄酮提取率为2.41%,方法重现性好,简单可靠。合欢花的镇静催眠作用明显优于藤合欢,且合欢花乙酸乙酯提取物效果最佳。合欢花镇静催眠药理作用的主要活性成分可能与其含有槲皮苷、异槲皮苷和槲皮素等黄酮类化合物有关。其作用机制可能与其保护细胞形态结构的正常性、加强5-HT、GABA的表达有关。且藤合欢的镇静催眠作用并不明显。
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