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生物表面活性剂是一类即含有亲水基团又含有疏水基团的两亲性物质,因其具有良好的乳化效果、助溶、可降解、无毒等特点,使其在很多领域里备受重视。当微生物利用一些非水溶性物质为唯一碳源时,在其发酵液的代谢产物中便会产生生物表面活性剂。本文旨在从一些不仅具有优良的烃降解能力而且有很好的降低发酵液表面张力的菌株中发现生物表面活性剂,并对其进行分离、纯化、鉴定及其合成相关调节因子的分析。选取的菌株分别为三株海洋烷烃降解菌:食烷菌Alcanivoraxdieselolei B-5,迪次氏菌Dietzia sp.N3ZF-1和毕赤酵母Pichiaguilliermondii 510-6jm。(1)食烷菌表面活性剂的鉴定:A.dieselolei B-5在以正十六烷为唯一碳源的MSM培养基中生长良好并能将发酵液的表面张力降至31mN m-1左右。将其发酵液离心后发现产生表活的主要物质主要存在于疏水层中。用氯仿:甲醇=1:1抽提其疏水层后,将表面活性物质的粗提物过硅胶柱、凝胶柱以及制备薄层色谱,最后获得具有良好生物表面活性的纯品。纯品经LCQ-MS、GC-MS、AAS及NMR检测,最后推测为脯氨酸脂(亲水基团均为脯氨酸而疏水集团为不同链长的脯氨酸脂同系物)。另外通过对脯氨酸脂的生物学和物理化学特性的研究发现,这种氨基酸脂有很低的CMC值(40mg l-1)、很宽的温度和pH稳定范围、很强的离子强度耐受性及很好的乳化能力,而且无抗菌活性,对环境友好。因此此种脯氨酸脂表面活性剂有很大的研究和开发价值。(2)迪次氏菌表面活性剂的鉴定:菌株Dietzia sp.N3ZF-1是一株从南海深海沉积物中分离到的有良好烃降解能力的细菌,它在以正十六烷为唯一碳源的液体培养基中可以将发酵液的表面张力降至33.6mN m-1。通过分离纯化,得到其表活物质纯品,经鉴定定性为双鼠李糖脂。尽管此双鼠李糖脂在结构上与以往报道的双鼠李糖脂结构有很高相似性,但是在Dietzia属中关于产表面活性剂及其具体成分都是首次报道。(3)毕赤酵母表面活性剂的鉴定:P.guilliermondii 510-6jm有很好的烃降解能力,并且能将发酵液表面张力降低至28mN m-1左右。其生物表面活性成分经分离鉴定后确定为甘露糖赤藓糖醇脂(MELs),是一种非常有应用价值和经济价值的新型非离子型糖脂类生物表面活性剂。以往尽管有关于酵母可以产生MELs的报道,但是在Pichia属中确是首次报道。另外,通过设计引物对510-6jm的糖脂代谢基因的扩增,获得了两个关键基因序列,这在此属中也是首次报道。总之,通过对这三株菌产生的表面活性剂成分及相关调控因素的分析,不仅为生物表面活性剂增添了新的成员,而且为研究生物表面活性剂产生和调控提供了更多的理论支持。