积雪草抗老年性痴呆有效部位的筛选及药理作用的研究

来源 :广西中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:qianjiuzhou
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目的:对积雪草不同提取部位进行体外抗老年性痴呆(AD)筛选,确定有效部位,并研究其抗AD相关药理作用。从实验动物记忆行为学指标来探究有效部位对快速老化模型小鼠SAMP8记忆行为的改善作用;探究其对SAMP8小鼠体内自由基代谢和APP、BACE-1基因表达的影响,为研究和开发积雪草成为新的抗AD药物提供科学依据。  方法:1.积雪草有效部位体外筛选:采用MTT法体外测定积雪草不同提取部位对小鼠肾上腺嗜铬瘤细胞株细胞PC12增殖的影响。2.体外抗AD的作用研究:采用MIT法检测积雪草乙酸乙酯部位对Aβ25-35片段造成PC12细胞的损伤模型的增殖作用,Hoechst33258染色后,用荧光显微镜观察积雪草乙酸乙酯部位作用细胞损伤模型的形态学变化。3.急性毒性实验(MTD测定):给实验小鼠灌服最大浓度和最大容量的积雪草乙酸乙酯部位,测定小鼠灌胃的最大耐受量。4.体内抗老年性痴呆(AD)作用研究:采用Morris水迷宫方法以寻求次数、逃避潜伏期、平台象限比等为指标对小鼠记忆行为进行检测,观察中药积雪草乙酸乙酯部位对小鼠行为学的影响。用Elisa法测定药物对小鼠脑组织中SOD、GSH-PX的影响;采用半定量反转录聚合酶链反应(RT- PCR)测定SAMP8鼠脑内APP,BACE-1mRNA含量。  结果:1.通过MTT法,筛选出积雪草有效部位为乙酸乙酯部位。2.体外抗AD的作用研究显示:①在PC12细胞致AD模型的预防作用实验中,乙酸乙酯部位对细胞有保护作用,通过荧光显微镜观察到用药组的凋亡细胞少于对照组与M T T的结果相符;②在PC12细胞致AD模型的治疗作用实验中,乙酸乙酯部位对细胞有保护作用,通过荧光显微镜观察到用药组的凋亡细胞少于对照组与MTT的结果相符。3.急性毒性实验结果表明,小鼠灌胃给药的最大给药量为每日32g生药,相当于成人日用量的3200倍。4.体内抗AD作用研究显示:Morris水迷宫学习能力测试:⑴游泳能力测定结果显示,各组间比较无明显差别(P>0.05)。⑵定位航行实验:①模型对照组逃避潜伏期与其他各相比明显延长;中剂量组逃避潜伏期与模型对照组比较明显低于模型对照组(P<0.01)。②模型对照组寻求次数均低于其他各组;中剂量组与模型对照组的比较明显高于模型对照组(P<0.01)。③模型对照组平均停留时间明显比其他给药组短;中剂量组与模型对照组比较明显长于模型对照组(P<0.01)。④模型对照组平台象限比明显低于中剂量组(P<0.01)。⑶脑组织相关酶学指标测定:①SOD测定:除低剂量组外其他各组与模型对照组比较均有显著性差异(P<0.05)。②GSH-PX测定:中剂量组及Hup-A组与模型对照组比较有显著性差异(P<0.05),其他两组与模型对照组相比都无差异。⑷脑组织相关痴呆基因指标测定:①BACE-1测定:Hup-A组及中剂量组与模型对照组比较有非常显著性差异(P<0.01),高剂量与模型对照组比有显著性差异(P<0.05),低剂量组与模型对照组比较无显著差异。②APP测定:除高剂量组和低剂量组外,其他两组与模型对照组相比有显著性差异(P<0.05)。  结论:  1.积雪草乙酸乙酯部位在体外对PC12细胞有较好的保护作用;并且对由Aβ25-35片段引起PC12细胞的损害也有较好的保护和治疗作用。  2.积雪草乙酸乙酯部位有一定的抗脑痴呆的作用,其作用的机制可能与改善小鼠的学习记忆能力,提高小鼠的抗氧化能力以及抑制 APP、BACE-1基因的表达有关。
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