肿瘤抑素19肽对低分化胃癌细胞体内外抑瘤作用的研究

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目的:通过对人低分化胃癌细胞系SGC-7901状态的检测和接种细胞数目,通过对胃癌裸鼠原位种植模型和其它建立胃癌模型方法进行比较研究,探讨建立良好胃癌的动物模型的标准。为探索肿瘤生长的本质及其发生发展规律,研究人类肿瘤的病因学、发病学和新抗癌药物的研发提供重要的平台。通过对肿瘤抑素19肽在体外和原位胃癌种植模型的体内实验研究,探讨其抑制肿瘤生长和促进肿瘤细胞凋亡发生的机制。 方法:1.采用腹腔注射SGC-7901细胞,使裸鼠形成腹水后采用光镜及电镜观察细胞状态。2将购买的SGC-7901细胞以及形成腹水后的肿瘤细胞分别以1×10<8>、1×10<7>和1×10<6>个细胞数进行裸鼠皮下接种,每组接种5只。观察其肿瘤形成时间、大小、状态及病理学变化。3.对SGC-790l细胞稳定转染eGFP2。4.采用OB生物胶黏贴建立胃癌的原位种植模型(15只),胃壁接种细胞(15只)和腹腔注入肿瘤细胞(5只),观察其肿瘤大小、侵袭及转移情况,进行三种模型的比较。5.采用亲和层析的方法提取19肽,用分子筛G15去除溶剂中的DTT。6.采用MTT和生长曲线检测19肽对细胞的活性影响;采用HE染色、电镜、TUNEL和流式细胞仪等检测19肽对体外细胞的促凋亡作用。7.建立胃癌原位种植模型后采用尾静脉注入19肽,隔日给药,30天后处死裸鼠,测量肿瘤大小以及对各脏器进行病理检测。8.将对照组和19肽用药组的胃癌组织进行TUNEL检测; Fas/FasL和Bcl2/bax的免疫组织化学检测。 结果:1.SGC-7901细胞接种裸鼠形成腹水后进行培养的肿瘤细胞增殖状态发生改变。2.购买的SGC-7901细胞以1×10<8>及1×10<7>接种裸鼠,在第21天肿瘤组织中央均出现出血和坏死;1×10<6>的裸鼠第21天未见肉眼可见的肿瘤形成。腹水形成后的肿瘤细胞,接种1×10<8>个在第21天肿瘤组织中央可见大面积的出血和坏死;接种1×10<7>及1×10<6>的裸鼠在第21天均未见出血和坏死,并且接种1×10<7>个细胞的肿瘤组织体积较大。3.获得稳定表达eGFP2的SGC-7901细胞。4.胃原位组织块OB胶粘贴建立的模型,肿瘤组织以浸润性生长的方式,发生局部浸润、胃壁淋巴管转移和静脉侵入;胃壁接种细胞的裸鼠可伴发有腹腔内种植转移,在胃的浆膜下肿瘤生长较小,同时也可见到肿瘤组织侵入粘膜下层。腹腔注入肿瘤细胞的裸鼠很快就出现腹水并发生远处脏器转移,生存时间较短。5.19肽作用于SGC-7901细胞,随着浓度的增高细胞活性降低。6.19肽作用于SGC-7901细胞和人脐静脉内皮细胞HE切片、电镜和AO/EB染色可见到凋亡小体的存在。 7.19肽作用后对两种细胞进行细胞周期检测可见肿瘤细胞发生G0/G1期阻滞,早期凋亡检测在肿瘤细胞内可见到大量调亡细胞。8.19肽体内用药组肿瘤体积小于对照组体积。9.TUNEL检测可见到用药组内大量阳性表达。10.体内用药组Fas表达增多;FasL表达减少。体内用药组和对照组Bcl2和bax表达无差异。 结论:1.建立胃癌动物模型之前所获取的肿瘤细胞进行鉴定后才可使用。2.接种裸鼠形成腹水后的细胞,更容易建立皮下接种胃癌动物模型,以接种细胞数为1×10<7>的肿瘤生长较好。3.胃原位组织块OB胶粘贴建立的模型,具有人胃癌自然生长过程的特点,可以为肿瘤实验研究提供基础的平台。4.合成后的19肽经过G15分子筛可以有效地去除溶液中DTT。5.19肽具有抑制SGC-7901细胞的生物学活性。6.19肽具有促进SGC-7901细胞凋亡作用。7.通过亲和层析提取得到的19肽和生物公司所合成的具有相同的生物活性。8.19肽对胃癌具有抑制其生长和促进其凋亡的作用,其中以6.6mg/kg的浓度抑制肿瘤生长最好。
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