毒性弥漫性甲状腺肿（Graves病）是一个多基因控制的自身免疫性甲状腺疾病。近年来研究提示，Graves病的发病与CTLA4（Cytotoxic T-lymphocyteantigen-4）基因的多态性有关。CTLA4（细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4）基因位于人类的2号染色体，包含了4个外显子，其中，外显子1和2编码了CTLA4的细胞外段。细胞外段N末端为前导肽，前导肽的下游包含了配体结合位点。外显子3编码跨膜区，外显子4编码细胞内段。由于剪接方式不同，从人的CTLA4基因可转录形成不同形式的mRNA，由这些mRNA可翻译出不同的CTLA4变异体。CTLA4是一种免疫负调控蛋白，表达于活化的CD4+和CD8+T细胞，其配体是B7。B7是重要的协同刺激分子，主要表达于抗原提呈细胞表面，属于免疫球蛋白超家族成员。CTLA4与B7分子结合产生抑制性信号，下调或终止T细胞活化。如果CTLA4表达异常，免疫耐受易被打破，自身免疫病易发生。近年来，位于CTLA4基因的3’非翻译区的CT60A/G单核苷酸多态性与Graves病的相关性研究颇受人们的关注。但是，CT60与Graves病的相关性因地区和种族而异，不同地区的研究者对其报道不完全相同。在本课题中，我们收集到了89例外周血样本。采用这些标本，我们研究了CT60单核苷酸多态性和Graves病发生的相关性，希望能够从基因水平上为该疾病的诊断、治疗提供一定的帮助。根据研究目的，将89例样本分为Graves病例组42例，正常健康对照47例。利用盐析法提取外周血细胞基因组DNA。以基因组DNA为模板，利用PCR钓取了包含CT60位点的611bp的DNA片段，对其进行序列分析。采用SPSS软件分析CT60A/G的SNP和Graves病的相关性。Hardy-Weinberg平衡检验显示，抽样外周血可被用于CTLA4基因CT60（rs3087243）位点多态性与Graves病的相关性研究（P>0.05）。疾病的相关性分析显示：CT60(rs3087243)A/G的SNP和Graves病未见相关。CT60A或G出现频率及基因型A/A,A/G,G/G均未见和Graves病的相关性（P>0.05）。在研究89例样本的CT60A/G的SNP和Graves病相关性时，采用了PCR产物直接测序法进行研究。在小量样本研究时，该方法比较方便、快速。但是若对大量样本的SNP基因型进行检测时，则工作量巨大，相对繁琐。等位基因特异性PCR是已经用于SNP检测的一种方法，比较适合用于大量样本初级筛选。但是这种方法对PCR的反应条件要求严格，准确率不高。因此，我们建立了等位基因特异性PCR的方法学平台，并对该方法进行改进，希望提高这种方法的准确率。同时，希望能在临床研究时，将改进的方法应用于已知位点的SNP大样本的初级筛选。结果显示，可以用已知CT60基因型的模板成功建立等位基因特异性PCR方法学平台，但是模板浓度可能对此方法是有影响的，检测时可能出现假阳性或假阴性结果。我们通过设计特殊的上游引物对该方法进行改进，在SNP位点处前一位或后一位再变一个碱基使其与模板错配，增强该方法的特异性。对此方法进行改进后发现，设计上游引物时，在SNP位点前一位和后一位变一个碱基的实验结果相同。分别用三种CT60基因型（A/A,A/G, G/G）的样本为模板时，可以成功改进该方法。确定了改进的PCR反应条件后，用不同的已知CT60基因型的样本对改进的方法进行验证，结果发现，改进的方法的准确率为58.33％。