GPR50促进神经前体细胞的增殖和分化的研究

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目的:有文献报道哺乳动物端脑的发育和神经前体细胞的增殖和分化有关。这种增殖和分化的过程受到严格的时间和信号通路的调控必须非常准确,神经前体细胞能够增殖产生新的神经前体细胞,从而维持神经前体细胞的数目。同时,神经前体细胞又能分化成不同的细胞,可以分化成神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞,神经前体细胞的这种增殖和分化受到一系列的信号通路和蛋白分子的共同调节,如果此过程发生紊乱的会造成一系列神经系统疾病,神经前体细胞的分化和增殖的过程为神经系统疾病的治疗提供了一定的基础。许多基因都和神经前体细胞的增殖和分化有关。有报道证明GPR50和双情感障碍、抑郁症以及精神分裂症神经系统疾病有关,我们就想既然GPR50也和一些神经系统疾病有关,那么GPR50对于神经前体细胞的增殖和分化是否有一定的作用。因此,我们的研究主要定位在GPR50对于神经前体细胞增殖和分化的研究。  方法:为研究GPR50在神经前体细胞中的表达,分别从三个方面进行了检测, GPR50在离体培养的神经前体细胞中的表达、GPR50在胎鼠脑组织侧脑室的神经前体细胞中的表达以及离体培养的神经前体细胞和胎鼠脑组织的GPR50的RNA的表达。为了研究GPR50对体外培养的神经前体细胞的增殖和分化的作用。我们用离体培养的神经前体细胞,神经球培养在生长培养基中,分化的神经前体细胞培养在分化的培养基中。检测神经前体细胞的增殖是在电转对应的质粒或者siRNA后,神经前体细胞电转培养三天后,在细胞固定前三小时,换为加有Brdu的新的生长培养基,转染的细胞分别染色Brdu和DAPI。分化的细胞体外分化三到四天后,分别染色TUJ1和DAPI。体内子宫内电穿孔实验,此实验是注射8微克2微升的空载质粒和 GPR50的质粒到胚胎期14.5天的胎鼠的侧脑室,等胎鼠到胚胎期17.5天时取脑袋。进一步分析,分别染色不同的抗体Brdu、TUJ1、Tbr1、Cux1、Sox5进行分析。  结果:GPR50在侧脑室神经前体细胞中有表达,在转染GPR50 siRNA和对照组后Brdu阳性细胞数目是减少的,同样电转GPR50的质粒相对于空载体时,Brdu阳性细胞数目是增加的。神经元阳性细胞数目是减少的在电转siRNA后,对应的过表达GPR50后神经元阳性细胞数目是增加的。同时,皮层不同层的神经元中,Tbr1和Sox5的阳性细胞数目在电转GPR50后是增加的,而Ctip2和Cux1阳性细胞数目是没有变化的在电转GPR50后。  结论:总之,GPR50虽然促进神经前体细胞的增殖,但对于侧脑室的神经前体细胞的总数目没有影响,所以可能促进了神经前体细胞的分化,我们进一步检测到GPR50过表达后促进了深层神经元的产生,对表层神经元的产生没有影响,由此我们得出结论GPR50在皮层发育中起重要的作用。
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