青翘清热解毒活性组分及活性成分研究

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连翘为木犀科植物连翘Forsythia suspense(Thunb.)Vahl.的干燥果实,是我国一种传统中药,具有清热解毒、疏散风热、消肿散结的功效,其多以果实入药。现代研究表明,连翘的这些功效主要体现的是抗氧化、抑菌、抗炎等药理作用,而这些药理作用与连翘所含有的化学成分密不可分。近年来,由于环境污染、饮食生活习惯不良等因素造成的疾病越来越多,致使对中药的需求量不断增加,此时出现了一些假冒伪劣药品,严重威胁人类的身体健康。随着社会经济的发展,原有的中药质量标准和含量测定的方法逐渐产生了一些局限性,进而生物活性测定的方法被提出。因此,探索连翘的生物活性测定方法具有重要的意义。本课题采用体现青翘清热解毒药理作用的抗氧化、抑菌、抗炎活性来进行研究。通过对不同青翘样品、不同青翘提取部位以及不同植物器官进行液相分析、总酚含量测定以及抗氧化、抑菌、抗炎活性评价,并结合双变量相关性分析探讨了总酚与抗氧化活性、总酚与抑菌活性、抗氧化活性与抑菌活性、成分与抗氧化活性、成分与抑菌活性、抗氧化活性与抗炎活性、抑菌活性与抗炎活性之间的相关性,以期为青翘生物活性方法的研究奠定基础。具体内容如下:1.以抗氧化和抑菌活性为筛选指标,利用0%、20%、40%、60%、80%、95%乙醇提取青翘,选出最佳提取溶剂,同时进行了指纹图谱分析。实验结果表明,青翘60%乙醇提取物中的主要成分含量较高,抗氧化(IC50=5.57 ug/mL)和抑菌(抑菌圈直径=18.5 mm)活性较强,即青翘60%乙醇提取物效果最佳。2.用60%乙醇提取30批青翘样品,并对其进行指纹图谱分析、总酚含量测定以及抗氧化和抑菌活性测定,同时结合双变量相关性分析对总酚与抗氧化活性、总酚与抑菌活性、抗氧化活性与抑菌活性以及成分与活性之间进行了相关性分析。实验结果表明,30批青翘样品均具有抗氧化和抑菌活性,而总酚含量与抗氧化活性和抑菌活性都具有显著的相关性。谱效相关分析表明抗氧化活性成分有连翘酯苷I、(+)-松脂素-β-D-葡萄糖苷、连翘酯苷A、芦丁、连翘苷等8个化学成分;抑菌活性成分有连翘酯苷I、连翘酯苷A等4个化学成分。3.采用中低压制备分离技术,对青翘醇提物进行初步分离,并对分离得到的不同洗脱部位(F1、F2、F3、F4、F5、F6)以及粗提物(FF)进行了抗氧化、抑菌和抗炎活性评价。实验结果表明,含有连翘酯苷A和连翘酯苷I的F2成分群具有较强的抗氧化、抑菌、抗炎活性,推测是青翘清热解毒的主要活性部位;在抗氧化活性方面,苯乙醇苷类化合物是其主要物质基础;在抑菌、抗炎活性方面,连翘酯苷A和连翘酯苷I为活性较强的成分,因此认为连翘酯苷I也可作为连翘的一个质量控制指标。此外,通过双变量相关分析可知,抗炎活性与抗氧化活性具有显著相关性。4.对青翘、老翘、连翘根和连翘茎进行指纹图谱分析,总酚和总黄酮含量测定以及抗氧化和抑菌活性评价。通过比较分析发现,青翘、老翘、根和茎均对金黄色葡萄球菌具有抑制作用和具有较好的抗氧化能力,其中,青翘抗氧化和抑菌能力较强。此外,连翘茎也表现出对金黄色葡萄球菌较强的抑制能力,具有潜在的利用价值。
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