【目的】细胞型朊蛋白(Cellular Prion Protein，PrP)在人恶性黑素瘤M2细胞系中，对其迁移能力影响因素的相关初步研究。
　　【方法】1)使用Crisper/Cas9系统建立M2细胞敲除人PrP蛋白基因PRNP的稳定细胞系。2)检测M2PrP-细胞表型的改变，在M2PrP-细胞中使用PrP-pcDNA3.1过表达外源PrP，并检测细胞表型的改变是否能够恢复，以排除可能存在的基因脱靶效应。3)通过免疫荧光实验观察敲除PRNP基因后，细胞迁移能力改变所伴随的细胞骨架(F-actin表达水平)变化。4)使用免疫印迹实验检测M2和M2PrP-细胞迁移相关蛋白表达水平的差别，并使用不同相关信号通路及激酶抑制剂刺激M2细胞，观察是否存在迁移相关蛋白表达水平的改变。然后，以有效抑制剂直接刺激M2细胞，通过细胞划痕实验观察其迁移能力是否发生改变。之后使用实时荧光定量PCR检测迁移相关蛋白的mRNA水平是否受到PrP表达的影响。5)使用免疫荧光染色共定位及免疫共沉淀实验探究随迁移能力降低而改变的蛋白分子间是否存在可能的相互作用。
　　【结果】1)在M2细胞中使用Crisper/Cas9敲除PRNP基因后，多种实验验证M2PrP-细胞中膜蛋白PrP敲除成功，同时发现PRNP基因的敲除会导致细胞迁移能力的降低和细胞增殖能力的下降。2)M2PrP-细胞中使用载体pcDNA3.1过表达外源PrP行回补实验，仅可以恢复细胞的部分迁移能力，同时发现细胞增殖能力的降低可能是因为基因编辑所致脱靶效应造成。3)使用免疫荧光实验观察发现M2和M2PrP-细胞中PrP的表达在提高细胞迁移能力的同时，降低胞质内细胞骨架主要成份之一F-actin的表达水平。4)使用不同相关信号传导通路及激酶抑制剂作用于M2细胞时，发现仅有使用Akt抑制剂可降低F-actin相关蛋白p-hsp27的表达。并且Akt抑制剂在细胞划痕实验中可以有效抑制M2细胞的迁移。但是，实时荧光定量PCR显示M2和M2PrP-细胞中Akt蛋白的mRNA表达水平无显著差异。5)在M2细胞中，Akt和hsp27两种蛋白间存在空间共定位及免疫沉淀共纯化的相互作用。
　　【结论】在人黑素瘤M2细胞系中，细胞型朊蛋白PrP可通过影响Akt-hsp27-F-actin轴促进M2细胞迁移，提示PrP的表达可能与人黑素瘤的迁移能力相关，本工作有可能为今后人黑素瘤的肿瘤生物学研究提供部分基础。