蓖麻FAH12、FAD2与FAE1基因干扰载体的构建与高油酸蓖麻的遗传转化

被引量 : 0次 | 上传用户:bjbysj44
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
蓖麻种子含有约50%-60%蓖麻油。蓖麻油作为理想的润滑油被广泛应用于机械、航空、塑料等行业,然而作为新型的生物柴油原料,要求有较高的油酸含量。而通过RNA干扰技术阻断油酸合成途径的下游支路使油酸积累,从而获得高油酸蓖麻是促进蓖麻作为生物柴油原料应用的有效途径。本研究分别克隆了蓖麻油酸合成代谢途径中的蓖麻油酸(FAH12)、亚油酸(FAD2)和超长链脂肪酸(FAE1)三个关键酶基因片段,构建同时干扰这三个基因的种子特异表达载体并进行遗传转化,获得以下研究结果:1、根据GeneBank上公布的蓖麻FAH12基因(XM00252808l)、FAD2基因(XM002530658)以及FAE1基因(XM002531584)序列,分别克隆了这三个基因保守序列中的片段,长度分别为162bp、250bp和332bp,并将这三个片段连接成一个复合片段,命名为Fahde.2、首次构建了蓖麻中同时干扰三基因的种子特异表达载体:将复合片段Fahde正反方向插入含种子特异启动子Albumin的pFGC1008载体中,构建了FAH12、FAD2和FAEl基因的RNA干扰载体,同时沉默这三个基因。3、建立了蓖麻离体再生体系:以蓖麻品种淄5号和秀蓖2号的成熟种子胚轴为外植体,在含TDZ的改良MS培养基上,平均每个外植体可产生4个不定芽。不定芽经伸长、诱导生根而发育成完整的植株。淄5号和秀蓖2号在产生不定芽数量及根分化能力上没有明显差异,说明这两个蓖麻品种基因型对体外再生体系的建立没有明显影响。4、初步建立了蓖麻遗传转化体系:以黑暗条件下预培养5天的种子胚轴为外植体,经OD600值0.2-0.5的农杆菌重悬液浸染10min并共培养3天后,转至20mg/L潮霉素浓度培养基中进行筛选。从种子萌发到诱导抗性苗生根的过程需要约75天。抗性苗通过PCR检测证明为转基因植株。5、三基因干扰载体转化蓖麻淄5号的结果:通过农杆菌介导法,共筛选得到抗性苗64株,其概率为5.12%,获得1株转基因苗,转化率为0.08%。
其他文献
简述反馈模拟与自回归模型2种实时校正模型,并对"海葵"和"菲特"2场台风中周公宅水库的洪水预报进行校正,对校正结果进行分析比较。结果表明,本模型可有效提高周公宅水库洪水
电视访谈类节目是深受大众喜爱的一种播出模式。本文将从对电视访谈类节目的前期准备、采访过程以及如何吸引受众素等三方面研究电视采访如何深入的话题,并通过同类型节目的
说课是教师系统地说明某一课题的教学设想及理论依据的一种教学研究形式。对于在校师范生而言,说课比试讲的难度更大,因为说课不仅要说明"教什么"、"怎样教",更要说清"为什么
近些年来,各类投资主体纷纷投资水务行业,而全面了解所面临的特殊行业风险,并拟定应对措施,以成功投资水务无疑具有重要意义。文章全面分析了投资水务所面临的市场、冗员、体
本文以直齿圆柱齿轮为研究对象,应用UG软件建立齿轮的参数化模型,通过数据交换接口导入到ANSYS中创建有限元模型,并对该齿轮施加一定载荷进行有限元分析,分析结果可为齿轮优
首先简述我国字幕翻译的现状,及其所存在的一些问题。然后浅析字幕翻译的特点,以美剧《绝望主妇》为例,以目的论为理论基础,浅析影视字幕的相关问题及其策略,详细阐述了译者
为帮助经营者在国际商务沟通中取得成功,更好地开拓海外市场,该研究全面、正确理解全球化与文化的内涵,从群体取向、等级制度和高语境沟通这三个维度深入分析了中西方文化的
探讨并阐示针刺活血化瘀作用和方法及在现代针灸临床中的重要性,对《内经》中针刺活血化瘀理论以及历代医家对针刺活血化瘀的认识进行追溯,进而探讨和归纳针刺活血化瘀的原理
随着我国计算机技术与网络技术的快速发展,高校图书馆的服务模式也从传统单一的参考咨询,逐渐向智能化、个性化的方向发展,但也存在很多不足,无法完全满足广大师生日益提高的
新加坡与马来西亚自独立以来实现了经济的高速发展,并难能可贵地维持了政治和社会的总体稳定,两国的优势政党利用各种资源长期执政。但进入21世纪以来,随着经济社会的发展,中