【摘 要】
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该研究采用PK细胞培养猪瘟石门毒,经蔗糖密度梯度离心纯化后免疫小鼠,取免疫脾细胞与SP-Ag在PEG4000作用下融合,经间接ELISA法筛选,有限稀释法克隆3次,最终获得4株稳定分泌抗
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该研究采用PK<,15>细胞培养猪瘟石门毒,经蔗糖密度梯度离心纯化后免疫小鼠,取免疫脾细胞与SP<,2/0>-Ag<,14>在PEG4000作用下融合,经间接ELISA法筛选,有限稀释法克隆3次,最终获得4株稳定分泌抗CSFV-Shimen的McAb杂交瘤细胞株,分别命名为AC9、CF8、DG5和EC9,并接种小鼠腹腔生产单抗腹水,ELISA效价为1:2000至1:8000不等.四株单抗与基因工程CSFV E2蛋白反应结果表明AC9、CF8和EC9是抗CSFV E2蛋白的单抗.单抗AC9.DG5和EC9与SDS处理前后的CSFV反应无明显差异,而CF8不与SDS处理后的CSFV反应,CF8针对的抗原表位的抗原性与空间构象密切相关.用AC9和CF8单抗对CSFV进行抗原捕获间接ELISA试验(ACI-ELISA),通过一元单抗和二元单抗CAI-ELISA试验的比较,结果表明AC9与CF8两种单抗协同作用可使ELISA反应值提高1倍.封闭对比试验表明封闭与否对试验结果无显著影响.通过方阵试验找出了McAb和血清多抗(PcAb)的最佳工作稀释度.用有限稀释法测定了试验的敏感度,并确定了病料的实际工作稀释度.通过取代试验肯定了ACI-ELISA试验的特异性.最后用ACI-ELISA与PCR对30份病料的检测结果比较,表明ACI-ELISA与PCR检测结果有很高的符合率.
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