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骨骼肌是机体运动的主要执行者及代谢活动的主要调控因子，其生长发育主要受一系列转录因子及表观遗传调控因子的调控。mircoRNA长度为18-24个核苷酸，通过与靶基因mRNA的3非翻译区(3UTR)结合，在转录后水平调控靶基因的表达。研究表明，mircoRNA在骨骼肌的发育过程中发挥着重要的作用。通过mircoRNA测序分析，发现miR-432-5p在35日龄仔猪的背最长肌中的表达水平显著高于在287日龄成年荣昌猪的表达水平，差异高达7倍;且miR-432在小鼠、人和猪等不同物种中高度保守。基于此，本研究以C2C12成肌细胞系为研究材料，旨在探索miR-432在骨骼肌成肌细胞增殖与分化中的作用及调控机制。 本实验通过对成肌细胞转染miR-432模拟物(mimics)或miR-432抑制物(inhibitor)，研究了miR-432对成肌细胞增殖和分化的作用;运用生物信息学和双荧光素酶报告试验，预测并验证miR-432的靶基因，进一步探索了miR-432调控成肌细胞增殖与分化的分子机制。获得如下主要结果: 1.miR-432抑制成肌细胞的增殖 在成肌细胞中过表达miR-432可以显著下调增殖相关基因Cyclin E，PCNA和CDK2mRNA与蛋白表达水平，并显著下调S期的细胞数及总的细胞数目;相反，抑制miR-432后促进了成肌细胞的增殖过程。 2.miR-432抑制成肌细胞的分化 过表达miR-432后可以显著抑制分化关键转录因子MyoG和标志基因MyHC mRNA和蛋白表达水平;通过免疫荧光染色技术，发现miR-432能显著抑制肌管的形成并下调分化指数。 3.miR-432直接靶定E2F3和P55PIK构建野生型及突变型双荧光素酶报告载体后，miR-432能显著抑制E2F3和P55PIK野生型荧光素酶活性，而不影响其突变型荧光活性。不同浓度的mimics处理成肌细胞后，E2F3和P55PIK的mRNA表达呈现浓度依赖式下降。 4.miR-432通过抑制P55PIK介导的PI3K/Akt/mTOR通路抑制成肌细胞的分化 过表达miR-432能显著下调分化期的p-Akt/t-Akt及p-mTOR/t-mTOR比值，但不影响增殖期的p-Akt/t-Akt及p-mTOR/t-mTOR比值。当加入低浓度的胰岛素(insulin)后，miR-432对分化的抑制作用被削弱，而加入高浓度的insulin后能基本消除miR-432对分化的抑制作用。 本研究基于miRNA测序，解析了中国西部地区肉质优良地方品种荣昌猪的肌肉发育特性，发现miRNA-432-5p在35日龄荣昌猪背最长肌的表达显著高于287日龄，进一步研究表明该miRNA靶向E2F3和P55PIK，并通过PI3K/AKT/mTOR信号通路抑制成肌过程。研究结果为探索中国地方猪品种肉质优良特性的非编码RNA调控提供了新的候选基因，也为猪优良肉品质性状选育提供了科学依据。