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【背景】食管癌的全球发病例数占比排在各类肿瘤的第七位,死亡例数占比排第六位。2020年,全球新确诊食管癌患者超过60万例,且其发病率仍在上升。由于缺乏有效的早诊和治疗方法,其五年生存率极低。因此,开发特异性的食管癌早期诊断标志物并建立个体化的靶向治疗手段对于提升食管癌的诊治水平意义重大。近年来,随着lnc RNA在肿瘤中的重要作用逐渐被揭示,lnc RNA越来越受到研究者们的关注。然而,lnc RNA的功能及其在肿瘤进展中的潜在机制只有一小部分被阐明,其中大部分仍然是未知的。就食管鳞癌而言,仍有大量与食管鳞癌发生密切相关的lnc RNA尚未被发现。前期,我们通过分析TCGA数据库中食管癌和癌旁组织中差异表达的lnc RNA,筛选出差异表达显著的lnc RNA共597个。其中,LINC01234在食管鳞癌中高表达且与患者预后密切相关,但其在食管鳞癌中的作用和机制尚不清楚。因此,围绕该分子的研究将可能有助于进一步理解食管鳞癌的发病机制,为肿瘤靶向治疗奠定基础。【目的】1.检测LINC01234在食管鳞癌组织和细胞中的表达水平,并分析其表达水平与患者预后的关系。2.探究LINC01234表达变化对食管鳞癌细胞功能的影响。3.探讨LINC01234促进食管鳞癌增殖和转移的调控机制。【方法】1.通过生物信息学分析和q RT-PCR检测等方法分析LINC01234在食管鳞癌组织及细胞中的表达模式,以及其表达水平与患者预后的关系。2.通过转染sh RNA慢病毒或过表达质粒分别构建LINC01234表达敲低和过表达的食管鳞癌细胞模型。3.利用CCK-8实验、Ed U实验、平板克隆形成实验探究LINC01234表达变化对食管鳞癌细胞增殖能力和克隆形成能力的影响;运用流式细胞技术检测LINC01234表达变化对食管鳞癌细胞周期和细胞凋亡的影响;利用Transwell实验观察LINC01234表达变化对食管鳞癌细胞侵袭和迁移的影响;通过裸鼠荷瘤实验和裸鼠尾静脉转移实验观察LINC01234表达变化对食管鳞癌细胞体内成瘤能力及体内转移能力的影响。4.通过生物信息学分析、q RT-PCR、Ch IP实验、双荧光素酶报告基因等实验明确转录因子SOX2对LINC01234的转录激活作用。5.通过生物信息学分析、RNA-Pull down、蛋白质谱、RNA测序、q RT-PCR、Western Blot和双荧光素酶报告基因实验等方法筛选并验证LINC01234的下游调控分子。6.探究LINC01234调控食管鳞癌增殖和转移的相关分子机制。【结果】1.生物信息学分析结果显示LINC01234在食管鳞癌组织中的表达高于癌旁组织;相比于正常食管粘膜细胞Het-1A,LINC01234在食管鳞癌细胞系中表达升高;与癌旁组织相比,LINC01234在食管鳞癌组织中的表达较高。且高表达LINC01234预测食管鳞癌患者预后不良。2.成功构建了LINC01234过表达和表达敲低的食管鳞癌细胞模型。CCK-8实验、Ed U实验、平板克隆形成实验表明上调LINC01234能够促进食管鳞癌细胞的体外增殖及克隆形成能力;反之,下调LINC01234能够抑制食管鳞癌细胞的体外增殖及克隆形成能力;Transwell实验表明上调LINC01234能够促进食管鳞癌细胞的体外侵袭和迁移能力;反之,下调LINC01234能够抑制食管鳞癌细胞的体外侵袭和迁移能力;流式细胞检测结果表明,上调LINC01234可促进细胞周期进展;反之,下调LINC01234抑制细胞周期进展;裸鼠荷瘤实验及裸鼠尾静脉转移实验表明下调LINC01234可抑制食管鳞癌细胞的体内生长及转移能力。3.转录因子SOX2能够直接结合于LINC01234的启动子区促进LINC01234的转录表达。4.通过生物信息学分析、RNA-Pull down、蛋白质谱、RNA测序、q RT-PCR、Western Blot等方法筛选并鉴定发现PCBP2是一个能与LINC01234结合的RNA结合蛋白。此外,我们还筛选到了一些受LINC01234调控的m RNA以及mi RNA分子。5.通过功能实验和分子生物学实验等证实LINC01234/PCBP2复合体可以与Dicer结合,调节mi R-512-3p的成熟,进而调控食管鳞癌细胞增殖。此外,LINC01234也可与mi R-140-3p作用进而调控食管鳞癌细胞转移。【结论】本研究发现LINC01234在食管鳞癌组织和细胞中表达升高,且其高表达预测患者不良预后,提示LINC01234表达升高与食管鳞癌的发生、发展相关。SOX2能直接结合于LINC01234的启动子区促进其表达。通过体内和体外功能实验发现LINC01234在食管鳞癌中发挥促癌作用。最后,本研究提出并阐明LINC01234可通过与PCBP2结合,调控mi R-512-3p的成熟,进而调控食管鳞癌细胞增殖。此外,mi R-140-3p可能参与了LINC01234介导的ce RNA机制进而调控食管鳞癌细胞转移。本研究为进一步理解LINC01234在食管鳞癌中的生物学功能和分子调控机制提供了理论支撑,LINC01234有望成为新的食管鳞癌预后标志物及治疗靶点。