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第一部分血清25-羟基维生素D水平与胃癌发病风险及临床病理特征的相关性研究研究目的：维生素D是一类脂溶性维生素,维生素D的主要功能是维持钙磷代谢稳态,调节骨代谢。近年来,维生素D在肿瘤防治中的价值受到基础和临床研究的广泛重视。血清25-羟基维生素D水平可以反映机体的维生素D状态。流行病学调查显示,血清25-羟基维生素D水平与乳腺癌、结直肠癌的发病风险呈负相关关系。但是,血清25-羟基维生素D水平与胃癌发病风险的关系尚不清楚。本研究试图揭示血清25-羟基维生素D水平与胃癌发病风险的关系,并且探讨血清25-羟基维生素D水平与胃癌的临床病理特征之间的相关性,从而为维生素D预测胃癌发生风险和进展程度提供客观依据。研究方法：采用免疫电化学发光法检测胃癌患者和健康对照者的血清25-羟基维生素D浓度,并进行统计分析,比较胃癌患者和健康对照者的血清25-羟基维生素D水平有无统计学差异。收集胃癌患者的一般资料(如年龄、性别、民族、采血季节、吸烟和饮酒情况)和临床病理资料(如临床分期、组织分化程度、淋巴结转移、远行转移、肿瘤大小、肿瘤部位)。分析血清25-羟基维生素D水平与胃癌患者的主要临床病理特征之间的关系,采用统计学分析方法比较不同临床分期、组织分化程度、肿瘤大小、远行转移等指标下对应的胃癌患者血清维生素D水平有无统计学差异。研究结果：胃癌组血清25-羟基维生素D水平为10.12±5.78ng/ml,对照组血清25-羟基维生素D水平为18.12±7.36ng/ml,胃癌组血清25-羟基维生素D水平显著低于对照组(t=8.51,P<0.001)。不同临床分期的胃癌患者血清25-羟基维生素D水平有显著性差异(F=3.26,P=0.025)。胃癌Ⅰ期的血清25-羟基维生素D水平显著高于胃癌Ⅲ期(P=0.01)和胃癌Ⅳ期(P=0.006)的水平。胃癌高分化组患者的血清25-羟基维生素D水平显著高于中分化、低分化和未分化组的水平(均有P<0.001)。血清25-羟基维生素D水平与胃癌淋巴结转移、远行转移、肿瘤大小、肿瘤位置均无显著相关性(均有P>0.05)。研究结论：血清25-羟基维生素D水平代表了机体的维生素D状态,本研究阐明了胃癌患者的维生素D水平比健康对照者低,低维生素D水平可以预示胃癌的高发病风险。胃癌的临床分期越晚,维生素D水平越低；组织学分化程度越差,维生素D水平越低。第二部分1,25-二羟基维生素D3对胃癌细胞凋亡与增殖的影响及作用机制研究目的：维生素D可以通过诱导肿瘤细胞凋亡、抑制肿瘤细胞增殖、促进肿瘤细胞分化来达到抑制肿瘤进展的目的。但是,在不同的肿瘤中,维生素D发挥的生物学功能不尽一致。维生素D对胃癌细胞的凋亡与增殖有何具体影响尚不清楚。1,25-二羟基维生素D3是人体内生物活性最强的维生素D代谢物,本研究拟从细胞和基因水平探讨1,25-二羟基维生素D3对胃癌细胞株BGC-823的细胞凋亡和细胞增殖的影响,并试图阐述其机制。研究方法：使用1nM,10nM,100nM三种不同浓度的1,25-二羟基维生素D3和无水乙醇对照处理培养的胃癌BGC-823细胞,通过流式细胞分析术检测胃癌细胞周期分布,采用TUNEL法结合流式细胞分析仪检测胃癌细胞的凋亡信号,通过Western blotting检测凋亡相关蛋白PARP、bax、caspase3、caspase8表达量的变化,检测维生素D受体的表达量变化,并检测AKT, ERK激酶磷酸化水平,探讨1,25-二羟基维生素D3调节胃癌BGC-823细胞凋亡的可能机制。采用RT-PCR法检测维生素D代谢关键基因CYP24A1,细胞周期相关基因p21的表达量变化。研究结果：TUNEL实验结果表明,10nM1,25-二羟基维生素D3显著诱导胃癌细胞凋亡(P<0.05)。Western blotting实验结果表明,1,25-二羟基维生素D3处理的BGC-823细胞的PARP fragment/PARP, cleaved caspas3/caspase3, bax蛋白表达水平显著高于对照组(P<0.05)。1,25-二羟基维生素D3可上调胃癌BGC-823细胞中维生素D受体蛋白的表达量(P<0.05)。10nM和100nM1,25-二羟基维生素D3使BGC-823细胞的AKT磷酸化水平下调(均有P<0.05),1nM,10nM和100nM1,25(OH)2D3使胃癌BGC-823细胞ERK1/2蛋白磷酸化水平下调(P<0.05)。研究结论：1,25-二羟基维生素D3通过诱导胃癌细胞的凋亡、抑制胃癌细胞的增殖来发挥抗癌功能。1,25-二羟基维生素D3诱导胃癌细胞凋亡的机制可能是通过上调促凋亡蛋白bax的表达激活线粒体凋亡途径促进胃癌细胞凋亡,通过下调AKT磷酸化和ERK1/2磷酸化水平来抑制胃癌细胞增殖。第三部分1,25-二羟基维生素D3协同顺铂对胃癌细胞凋亡与增殖的调节及机制研究目的：胃癌的治疗方案正在由单一的手术治疗向临床综合治疗转变。顺铂是胃癌治疗的常用化疗药物,有些胃癌患者对顺铂的敏感性欠佳。本研究尝试将1,25-二羟基维生素D3与顺铂联合使用,探讨1,25-二羟基维生素D3协同顺铂调节胃癌细胞凋亡与增殖的效果及具体机制。研究方法：将1,25-二羟基维生素D3与顺铂单独或联合应用,处理培养的胃癌BGC-823细胞,采用流式细胞分析仪观察1,25-二羟基维生素D3对胃癌细胞周期分布的影响；采用TUNEL法结合流式细胞分析仪检测细胞凋亡信号；采用Western blotting方法检测凋亡相关蛋白bax, bcl-2, caspase3, caspase8的表达和细胞周期依赖蛋白抑制剂p21,p27表达量的变化。研究结果：与顺铂单独作用相比,1,25-二羟基维生素D3与顺铂联合作用使胃癌BGC-823细胞的凋亡信号更加显著(P<0.05)。1,25-二羟基维生素D3与顺铂联合作用的BGC-823细胞G0/G1期细胞比例显著高于对照组、1,25-二羟基维生素D3组和顺铂组(均有P<0.05)；1,25-二羟基维生素D3与顺铂联合作用的BGC-823细胞G2/M期比例显著低于对照组和1,25-二羟基维生素D3组和顺铂组(均有P<0.01)。与顺铂单独作用相比,1,25-二羟基维生素D3与顺铂联合作用显著下调caspase3蛋白的表达(P<0.05),上调bax蛋白的表达(P<0.05),但是对caspase8蛋白的表达无显著影响；显著下调了AKT, ERK1/2的磷酸化水平(均有P<0.05)；显著上调p21,p27蛋白的表达(P<0.01)。研究结论：1,25-二羟基维生素D3可协同顺铂促进诱导胃癌细胞凋亡,抑制细胞周期进展。1,25-二羟基维生素D3协同顺铂抗胃癌的作用机制可能是通过联合作用进一步上调了bax蛋白的表达；更加显著地下调AKT, ERK1/2的磷酸化；显著上调p21,p27蛋白的表达来实现的。