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产生超广谱β-内酰胺酶(Extended-spectrum β-lactamases ESBLs)是导致肠杆菌科细菌对第三代头孢菌素耐药的最常见机制，ESBLs尤其在肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌最为多见。大多数超广谱β-内酰胺酶由广谱酶TEM-1、2和SHV-1衍生而来，可以水解氧亚氨基头孢菌素类和单环β-内酰胺类抗生素。近年来，CTX-M型和OXA型ESBLs等非TEM型非SHV型ESBLs不断增多。产ESBLs菌株主要引起医院感染，已呈世界流行，成为临床治疗的一大难题。产ESBLs菌株可以发生垂直传播（克隆传播），也可以通过质粒或转座子进行产酶基因水平传播。各地ESBLs的流行情况差异很大，各个国家和地区产ESBLs菌株的发生率亦明显不同。国内有关这方面的报道较少，尚缺乏系统的研究。为了了解华山医院临床分离大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中产ESBLs菌株的流行情况、耐药性以及酶的型别、产ESBLs菌株感染的临床特征，我们进行了以下六个方面的研究。第一部分 临床分离大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中产ESBLs菌株的检测和基因型分析为了解临床分离大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中产ESBLs菌株的发生率、耐药性、流行性以及可能的酶基因型别，我们采用NCCLS表型确证试验对华山医院1999年临床分离的427株大肠埃希菌和559株肺炎克雷伯菌中进行了产ESBLs菌株的检测、使用琼脂稀释法测定了产ESBLs菌株对多种抗菌药物的耐药性、采用TEM型、SHV型β-内酰胺酶、CTX-M-1group、TOHO-1groupESBLs编码基因的通用引物对产ESBLs菌株进行扩增、并且运用PFGE技术对分离自ICU病房的产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌进行了DNA指纹图谱分析。结果显示，427株大肠埃希菌和559株肺炎克雷伯菌中产ESBLs菌株的检出率分别为 23.6%和51%，产ESBLs菌株主要分离自ICU和神经外科病房。产ESBLs菌株对于大多数β-内酰胺类和非β-内酰胺类抗菌药物（如氨基糖苷类、氟喹诺酮类、四环素、氯霉素等）明显耐药，对于β-内酰胺类/β-内酰胺酶抑制剂复方、头孢美唑、利福平较敏感，对于亚胺培南高度敏感；半数以上的产ESBLs菌株对头孢吡肟呈现敏感；产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌对于头孢他啶、阿米卡星、左氧氟沙星的耐药率有较大差异，产ESBLs大肠埃希菌对上述三药的耐药率分别为15.8%、48.5%、86.1%，肺炎克雷伯菌分别为79.6%、87.7%、45.6%。TEM型酶最为常见，SHV、CTX-M-1group次之，未发现TOHO-1group；<WP=5>部分产ESBLs大肠埃希菌和多数产ESBL肺炎克雷伯菌同时产生一种以上的β-内酰胺酶，少数产ESBLs菌株的ESBLs基因型不属于上述的四种基因型。分离自ICU病房的23株产ESBLs大肠埃希菌有10种PFGE谱型，最多见的一种谱型有5株细菌；73株产ESBLs肺炎克雷伯菌有16种谱型，多数的菌株属于Kpn-A (22株)、 Kpn-B (14株)、 Kpn-C (12株)三种谱型。本部分研究表明，产ESBLs菌株在临床分离的肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌中较为普遍、且为多重耐药菌株；TEM型是最为常见的β-内酰胺酶型别，CTX-M型ESBLs亦较为普遍。在医院ICU病房中存在着同一菌株的克隆传播流行，尤以产ESBLs肺炎克雷伯菌为著；临床上需要加强检测和防治。第二部分 产ESBLs菌株接合子的ESBLs表型鉴定、质粒分析、β-内酰胺酶型别和等电点测定为了了解临床分离产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中编码ESBLs的基因位于染色体或质粒、其传播及扩散特征以及为ESBLs的全编码基因的PCR扩增、克隆、表达及序列分析的研究提供基础，我们对临床分离的39株产ESBLs大肠埃希菌和67株产ESBLs肺炎克雷伯菌进行了接合试验，受体菌为E.coli K121037RIFRLac-；采用NCCLS表型确证试验对转移接合子进行了ESBLs的表型鉴定，琼脂稀释法测定转移接合子对多种抗菌药物的耐药性，采用TEM型、SHV型β-内酰胺酶、CTX-M-1group、TOHO-1groupESBLs编码基因的通用引物对转移接合子进行PCR扩增，超声粉碎法提酶、进行等电聚焦电泳测定酶等电点，碱裂解法提取供体菌和转移接合子中的质粒、进行电泳分析。结果显示，临床分离产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌接合转移的发生率分别为82.1%（32/39）和95.5%（64/67），转移频率多为10-4。所有转移接合子的NCCLS表型确证试验检测均为ESBLs阳性。转移接合子对氨苄西林、哌拉西林、头孢泊肟、头孢噻肟的耐药水平与供体菌相近，克拉维酸可以明显降低转移接合子对氨苄西林、头孢泊肟和头孢噻肟的耐药性，接合子对头孢美唑和亚胺培南极其敏感；与供体菌相比，接合子对氨苄西林/克拉维酸、头孢他啶、氨曲南、头孢吡肟的耐药水平明显降低。接合子对利福平的耐药水平以及乳糖发酵情况（Lac-）与受体菌相同。除萘啶酸和左氧氟沙星以外，细菌对其它非β-内酰胺类抗生素的耐药性均可以和ESBLs耐药性发生共转移；其中以阿米卡星和庆大霉素的耐药性共转移发生率最高。琼脂糖电泳显示接合子从供体菌得到了一个>23.1 Kb的质粒，受体菌Eco1037RIFRLac-未见上述现象。转移接合子中，仍然以TEM型β-内酰胺酶最为常见，CTX-M-1group型ESBLs次之；产ESBLs肺炎克雷伯菌转移接合子中的SHV型β-内酰胺酶明显减少，第一部分中检测的大多<WP=6>数SHV编码基因未能发生转移；部分细菌的TEM型编码基因和少数菌株的CTX-M-1