【摘 要】
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本论文由两部分组成,一、构建来自小麦的COMT的反义表达载体,转化烟草,研究抑制内源COMT对植物木质素合成及其生长发育的影响;二、利用花粉管通道法,将正义和反义COMT基因转
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本论文由两部分组成,一、构建来自小麦的COMT的反义表达载体,转化烟草,研究抑制内源COMT对植物木质素合成及其生长发育的影响;二、利用花粉管通道法,将正义和反义COMT基因转化小麦,获得转基因小麦,从而进一步分析.一、反义抑制COMT对植物木质素合成及其生长发育的影响构建含有小麦的咖啡酸-O-甲基转移酶(COMT)cDNA的反义表达载体,利用农杆菌法转化烟草.PCR,PCR-Southern检测显示目的基因片段成功转入烟草基因组.处于营养生长期的转基因植株表型与对照没有明显差异;而发育成熟的转基因植株的植株矮化,茎部木质素含量与对照差异不大,木质素的组成S/G比下降,部分木质部细胞发生变形.我们还发现转基因烟草种子发芽率提高,移栽2个月的子一代转基因植株光合速率、蒸腾速率有所增强.结果表明通过反义抑制COMT将影响木质素合成,并在不同的发育阶段,影响着植物的生长发育.二、利用花粉管通道法获得转基因小麦将构建好的含有Bar基因的正义和反义COMT表达载体利用花粉管法转化两个小麦品种(H4564和C6001),共获得转基因处理的种子1117颗,重新播种后,发育成苗分别为321株,总成苗率为28.7％.通过除草剂PPT筛选,分别获得PPT抗性植株31株.PCR检测抗性植株,获得PCR检测阳性植株5株,总阳性率为0.45％.阳性植株分别为H4564反义处理株1株,C6001的正义和反义处理株各2株.对小麦的植株高度,分蘖数等生理性状的分析发现,转基因小麦的分蘖数减少,植株高度降低.这些生理性状的改变与COMT基因转化的关系将有待于进一步验证.
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