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目的:糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)属于代谢性疾病的肾损害,是糖尿病(diabetes mellitus,DM)引起的一种危害严重的慢性并发症。本实验利用高脂饲料喂养联合小剂量链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)腹腔注射建立DM大鼠模型,分别予以化瘀中药、通络中药及厄贝沙坦进行干预,观察大鼠的一般情况、肾组织形态学的改变,以及检测血常规、血凝、血液生化指标、24小时尿蛋白定量及肾组织纤维连接蛋白(fibronectin,FN)和层粘连蛋白(laminin,LN)的表达水平等,来研究化瘀中药、通络中药分别对糖尿病肾病大鼠肾脏的干预作用,并且探讨其可能的作用机制。方法:清洁级健康雄性SD大鼠55只,体重100±20g,适应性喂养一周后,测定大鼠尿蛋白、尿糖及尿红细胞全部阴性。随机选10只作为正常对照组(C),给予普通饲料喂养,剩余大鼠给予高脂饲料喂养。喂养四周后,将高脂饲料喂养的大鼠禁食12小时以上,按35mg/kg腹腔注射STZ,72小时后连续三次测大鼠随机血糖≥16.7mmol/L为DM造模成功。造模成功的大鼠随机分为四组,模型组(以下简称M)、化瘀中药治疗组(以下简称H)、通络中药治疗组(以下简称T)、厄贝沙坦治疗组(以下简称I)。各治疗组给予相应药物灌胃,每日一次,连续16周。于16周末收集24小时尿液,测量24小时尿量,检测24小时尿蛋白含量;大鼠禁食12小时,称量大鼠体重,麻醉大鼠后,腹主动脉取血检测血常规、血凝及血液生化指标;留取肾组织进行光镜、电镜、免疫组化及RT-PCR检测。结果:1各组大鼠一般状态的比较正常对照组的大鼠一般情况良好;模型组及治疗组的大鼠均出现三多一少的症状(多食、多饮、多尿、体重逐渐减轻),以模型组的表现最为突出,各治疗组大鼠在治疗过程中症状有所缓解。实验期间正常对照组大鼠逃逸1只,模型组死亡3只,化瘀中药治疗组死亡1只,厄贝沙坦治疗组死亡1只。2各组大鼠体重及肾脏肥大指数(KI,右肾重/体重)的比较与正常对照组比较,模型组大鼠体重明显减轻,肾脏肥大指数明显升高(P<0.05);模型组和各治疗组之间的体重、肾脏肥大指数无统计学差异(P>0.05)。3各组大鼠24小时尿蛋白定量(24h UTP)的比较与正常对照组比较,模型组大鼠24小时尿蛋白总量水平明显升高(P<0.05);与模型组比较,各治疗组24小时尿蛋白总量水平降低(P<0.05);各治疗组之间无统计学差异(P>0.05)。4各组大鼠血液指标检测结果比较4.1血常规中血小板计数(PLT)结果比较显示:与正常对照组比较,模型组大鼠血小板计数明显增加(P<0.05);与模型组比较,各治疗组血小板计数明显减少(P<0.05);各治疗组之间无统计学差异(P>0.05)。4.2血生化中甘油三酯(TG)结果比较显示:与正常对照组比较,模型组大鼠甘油三酯水平明显升高(P<0.05);与模型组比较,各治疗组甘油三酯水平明显降低(P<0.05);各治疗组之间无统计学差异(P>0.05)。4.3血生化中低密度脂蛋白(LDL)结果比较显示:与正常对照组比较,模型组大鼠低密度脂蛋白水平明显升高(P<0.05);模型组和各治疗组之间无统计学差异(P>0.05)。4.4血生化中血浆总蛋白(TP)结果比较显示:与正常对照组比较,模型组、化瘀中药治疗组、通络中药治疗组血浆总蛋白水平降低(P<0.05);与模型组比较,化瘀中药治疗组、通络中药治疗组、厄贝沙坦治疗组血浆总蛋白水平升高(P<0.05);通络中药治疗组与厄贝沙坦治疗组血浆蛋白水平无统计学差异(P>0.05);厄贝沙坦治疗组与正常对照组血浆总蛋白水平无统计学差异(P>0.05)。4.5血生化中血肌酐(Scr)结果比较显示:与正常对照组比较,模型组大鼠血肌酐水平明显升高(P<0.05);与模型组比较,各治疗组血肌酐水平略有降低,但无统计学差异(P>0.05)。4.6血凝中血浆凝血酶原时间(PT)结果比较显示:与正常对照组比较,模型组大鼠凝血酶原时间减少(P<0.05);与模型组比较,各治疗组凝血酶原时间增加(P<0.05);各治疗组之间无统计学差异(P>0.05)。5肾脏病理形态学观察5.1光镜观察正常对照组的大鼠肾脏结构正常清晰;模型组的大鼠肾脏结构紊乱,肾小囊腔呈裂隙样改变,基底膜增厚,系膜基质增生,甚至出现球囊粘连;与模型组比较,各治疗组病变明显减轻;各治疗组间比较,通络中药治疗组的病理表现比其他治疗组略轻。5.2电镜观察正常对照组的大鼠肾脏结构正常清晰;模型组的大鼠肾脏肾小球毛细血管基底膜明显增厚,系膜基质增多,足突融合;与模型组比较,各治疗组大鼠均有类似病理表现,但程度较轻;各治疗组间比较,通络中药治疗组病理表现比其他治疗组略轻。6免疫组织化学法检测肾组织FN和LN的表达6.1 FN结果显示:正常对照组FN在肾小球的系膜区及基底膜少量表达;与正常对照组比较,造模的各组大鼠肾组织中FN表达明显增加(P<0.05);与模型组比较,各治疗组FN的表达明显减少(P<0.05);各治疗组间进行比较,通络中药治疗组、厄贝沙坦治疗组FN的表达较少,与化瘀中药治疗组有统计学差异(P<0.05)。6.2 LN结果显示:正常对照组LN在肾小管及其间质中少量表达;与正常对照组比较,造模的各组大鼠肾组织中LN表达明显增加(P<0.05);与模型组比较,各治疗组LN的表达明显减少(P<0.05);各治疗组间进行比较,通络中药治疗组、厄贝沙坦治疗组LN的表达较少,与化瘀中药治疗组有统计学差异(P<0.05)。7 RT-PCR检测肾组织FN m RNA、LN m RNA的表达7.1 FN结果显示:与正常对照组比较,造模的各组大鼠肾组织中FN m RNA的表达量明显增加(P<0.05);与模型组比较,各治疗组大鼠肾组织FN m RNA的表达量明显减少(P<0.05);各治疗组间进行比较,通络中药治疗组、厄贝沙坦治疗组FN m RNA的表达量较少,与化瘀中药治疗组有统计学差异(P<0.05)。7.2 LN结果显示:与正常对照组比较,造模各组大鼠肾组织中LN m RNA的表达量明显增加(P<0.05);与模型组比较,各治疗组大鼠肾组织LN m RNA的表达量明显减少(P<0.05);各治疗组间进行比较,通络中药治疗组、厄贝沙坦治疗组LN m RNA的表达量较少,与化瘀中药治疗组有统计学差异(P<0.05)。结论:1化瘀中药与通络中药均可以改善糖尿病肾病大鼠的一般情况,减少24小时尿蛋白总量,维持血浆蛋白的含量,对糖尿病肾病大鼠的肾脏有一定的保护作用。2化瘀中药与通络中药都能使血小板的数量减少,活性减低,防止糖尿病肾病形成血栓、栓塞等并发症。3化瘀中药与通络中药均能降低血浆中甘油三酯的水平,调节糖尿病脂质代谢紊乱。4化瘀中药与通络中药都能抑制糖尿病肾病大鼠肾组织FN、LN的表达水平,减轻糖尿病肾病病理改变,提示其对糖尿病肾病的治疗作用机制可能与延缓肾脏纤维化有关。5综合病理形态学观察及肾组织FN、LN的表达情况分析,在肾脏保护方面通络中药的效果优于化瘀中药。