论文部分内容阅读
目的:1.本实验通过建立高血脂症SD大鼠模型,并在其模型基础上成功建立牙周炎SD大鼠模型。2.分别检测各组SD大鼠TGF-β1、VEGF蛋白及其mRNA在牙周组织中的表达水平,探讨牙周炎与高脂血症之间存在的相关性,从而为临床提供有意义的参考。方法:1.动物分组与建模:将40只SD雄性大鼠适应性喂养1周后,随机分为四组(n=10):A组:正常对照组;B组:高脂血症组;C组:牙周炎组;D组:高脂血症+牙周炎组。A、C两组大鼠通过普通饲料喂养,B、D两组大鼠通过高脂饲料喂养,建立以B、D两组为高脂血症SD大鼠模型;C、D两组用0.20mm结扎丝结扎大鼠左侧上颌第一磨牙联合涂菌法,建立牙周炎模型。2.实验室检测:高脂饮食喂养6周后采集四组大鼠血清检测血脂四项,确定高脂建模情况;牙周结扎8周后采集SD大鼠颌骨样本进行Micro-CT扫描,观察大鼠牙槽骨吸收情况;14周大鼠处死后将其牙周组织经EDTA脱钙后脱水包埋制作组织病理切片,观察大鼠牙周组织炎症状态,来确定牙周炎模型建立情况。3.高脂血症和牙周炎SD大鼠模型建立成功后,通过ELISA酶联免疫吸附法检测牙周组织TGF-β1、VEGF蛋白表达水平;通过RT-PCR检测大鼠牙周TGF-β1、VEGF mRNA表达水平。4.统计学分析:采用SPSS20.0统计学软件,两组间数据的比较采用t检验或者秩和检验,多组数据间的比较采用方差分析或者秩和检验,检验水准为α=0.05,连续型变量若正态,则用均数±标准差(错误!未找到引用源。±s)表示,多组间的两两比较用SNK法进行数据分析。结果:1.高脂血建模:高脂饮食6周时检测B、D组血清TC、TG、LDL-C均高于A、C组,HDL-C水平均低于A、C组,有统计学意义(P<0.05)。高脂喂养14周:B组血清TC、TG、LDL-C均高于A组,HDL-C水平均低于A组,有统计学意义(P<0.05)。C组血脂四项与A组比较无统计学意义(P>0.05)。D组血清血脂四项与B组比较无统计学差异(P>0.05)。2.牙周炎建模:牙周结扎8W后观察四组大鼠牙周状态,A、B组牙龈无明显变化,牙周探诊正常,HE染色可见结合上皮附着紧密,牙周膜胶原纤维排列整齐;C、D组牙龈上皮钉突变长,固有层可见大量炎细胞浸润,牙周膜纤维排列紊乱,牙槽嵴顶高度降低,可见破骨细胞及骨陷窝。Micro-CT检测A、B、C、D四组大鼠牙槽骨吸收程度,统计结果为D>C>B>A。C组的牙槽骨丧失值与A组比较显著增加,有统计学差异(P<0.05)。D组与C组比较牙槽骨丧失值显著增加,有统计学意义(P<0.05)。3.ELISA检测四组大鼠牙周组织TGF-β1与VEGF蛋白表达水平,TGF-β1蛋白表达统计结果为:A>B>C>D。C组TGF-β1与A组比较降低,D组与B、C组比较显著降低,有统计学意义(P<0.05)。VEGF统计结果:D>B>C>A。B、C组VEGF蛋白水平高于A组,D组与B、C组比较,显著升高,有统计学差异(P<0.05)。4.RT-PCR检测四组大鼠牙周组织TGF-β1与VEGF基因表达水平,TGF-β1基因表达统计结果为:A>C>B>D。其中测得C组TGF-β1 mRNA表达低于A组,有统计学意义(P<0.05)。D组TGF-β1与B、C组比较显著降低,有统计学意义(P<0.05)。VEGF基因表达结果:B、C组mRNA水平与A组比较显著增加,有统计学差异(P<0.05)。D组VEGF基因表达与B、C组比较显著升高,有统计学差异(P<0.05)。结论:1.本实验通过特定高脂饲料喂养大鼠,6周成功建立高脂血症SD大鼠模型。通过牙周结扎联合龈沟涂菌法8周成功建立牙周炎SD大鼠模型。2.Micro-CT检测结果提示较高的血脂水平其牙槽骨吸收显著,提示高脂血症影响牙周炎的发展。3.检测四组大鼠牙周组织中的TGF-β1蛋白以及基因表达提示TGF-β1通过负调节抑制宿主免疫反应,加重牙周炎的进展。高脂血症可能引发牙周组织中VEGF表达增加,刺激牙龈血管生成从而加重牙周炎进展。RT-PCR结果提示高脂血症对牙周炎有促进作用。