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脑血管病(CVD)是严重威胁人类健康的常见病和多发病,而脑梗死又是最常见的脑血管病,随着老龄化社会的到来,其发病率呈上升趋势。由此带来的经济负担、造成的劳动力丧失和对国民经济建设产生的影响相当巨大。到目前为止,对于脑梗死尚无有效的治疗方法。近年来,人们研究发现骨髓间充质干细胞(BMSCs)是中胚层来源的具有自我更新能力和多向分化潜能的干细胞,可以分化为成骨细胞、成软骨细胞、脂肪细胞、肌腱细胞、成肌细胞和神经细胞等多种细胞成分。因其具有取材方便、可用于自体移植、不涉及伦理问题等优点,现已越来越受到研究者的重视。已有多个研究报告BMSCs移植治疗能改善脑缺血大鼠的神经功能,但是具体的机制还有待进一步的研究。本研究的目的是通过BMSCs移植治疗大鼠脑缺血再灌注损伤,初步探索BMSCs治疗脑缺血的可能机制并对其治疗效果进行初步评价。
方法:本实验的方法包括以下几个方面:
1、用全骨髓分离法和密度梯度离心分离法培养扩增大鼠骨髓间充质干细胞。
2、通过线栓法制作大鼠脑缺血模型。
3、将菲立磁标记的BMSCs注射入缺血大鼠脑实质内。
4、用磁共振扫描对BMSCs进行脑内示踪研究。
5、用磁共振影像对模型进行筛选评价,并对治疗前后梗死体积的变化进行探讨。
6、BMSCs对脑水肿的治疗效果的评估。
7、利用人源性骨髓间充质干细胞进行免疫组化研究,初步探讨其对细胞凋亡和突触再生的影响。
结果:
1、利用全骨髓分离培养法和密度梯度离心分离培养法均可以成功培养扩增大鼠骨髓间充质干细胞,且全骨髓分离法产率高,扩增迅速。
2、利用线栓法进行大鼠MCAO模型制作比较稳定可靠。
3、菲立磁可以成功标记BMSCs并在MRI影像上清楚辨认。
4、脑内示踪能清楚看见移植细胞所在位置,但未发现大规模的迁徙。
5、BMSCs移植治疗脑梗死后其体积缩小作用不显著。
6、BMSCs在减少脑水肿方面的疗效不显著。
7、人源性BMSCs能够减少细胞凋亡并促进突触再生。
结论:
1、人源性骨髓间充质干细胞脑内移植治疗脑缺血有一定的阻止细胞凋亡和促进突触重建作用。
2、大鼠骨髓间充质干细胞脑内移植对脑梗死体积和脑水肿的减少没有显著效果。
3、菲立磁标记BMSCs标记率高,能真实反应细胞在活体脑内的位置,是一种有效的BMSCs活体标记方法。
4、利用磁共振扫描对模型进行评估切实可行,磁共振图像与病理结果对照有较强的一致性。