【摘 要】
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猪急性腹泻综合征冠状病毒（swine acute diarrhea syndrome coronavirus,SADSCoV）,是我国的一种新型的猪腹泻病毒,可引起猪的急性腹泻综合征（swine acute diarrhea syndrome,SADS）,哺乳期仔猪感染后,病死率可达100%,使养猪业面临着这种新型冠状病毒的威胁,而其所引起的继发性细菌感染是使仔猪死亡率增高的重要原因。通过对攻毒及
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猪急性腹泻综合征冠状病毒（swine acute diarrhea syndrome coronavirus,SADSCoV）,是我国的一种新型的猪腹泻病毒,可引起猪的急性腹泻综合征（swine acute diarrhea syndrome,SADS）,哺乳期仔猪感染后,病死率可达100%,使养猪业面临着这种新型冠状病毒的威胁,而其所引起的继发性细菌感染是使仔猪死亡率增高的重要原因。通过对攻毒及对照组仔猪回肠粘膜组织进行16S测序分析发现,造成猪肠道粘膜所粘附的细菌群落结构差异的主要贡献类群为大肠杆菌,而且在对攻毒组和对照组进行T＿test组间分析时发现,大肠杆菌攻毒组的平均数量与对照组大肠杆菌的平均数量相比差异极显著（p＜0.001）。以上结果表明,在SADS-CoV攻毒后大肠杆菌是小肠粘膜粘附数量增加最多的菌种。为了探究SADS-CoV和大肠杆菌粘附的关系,本研究依据SADS-CoV体内攻毒实验的结果,利用IPEC-J2细胞建立SADS-CoV感染与大肠杆菌粘附的互作模型,并在以上互作模型中探究宿主ECM相关蛋白与大肠杆菌粘附的关联。通过所建立的两种因子互作细胞模型,以及所建立的计算大肠杆菌粘附的方法得到结果可知,同时接种SADS-CoV和O157型大肠杆菌在1 h和7 h相较于只单独接种O157型大肠杆菌的粘附数有显著的增加（p＜0.05）,而大肠杆菌k12和大肠杆菌25922均无类似规律,证明SADS-CoV感染IPEC-J2细胞会促进O157型大肠杆菌的粘附。对IPEC-J2细胞进行过表达ITGA5的质粒转染,之后再接种O157型大肠杆菌进行细菌粘附数的计数、转录水平表达和蛋白水平表达的测定。当过表达ITGA5时,接种细菌1 h后细菌的粘附数相较于未过表达而接种细菌的粘附数有显著的增加（p＜0.05）,转录水平极显著增加（p＜0.001）;接种细菌7 h后细菌的粘附数相较于未过表达而接种细菌的粘附有显著的增加（p＜0.05）,转录水平极显著增加（p＜0.001）,蛋白表达上调。结果表明,ITGA5的表达量变高会使O157型大肠杆菌对于细胞的粘附数增加。当沉默ITGA5时,接种细菌1 h后细菌粘附数相较于未沉默而接种细菌的粘附数没有明显差异,转录水平极显著下降（p＜0.01）;接种细菌7 h后细菌粘附数相较于未沉默而接种细菌的粘附数显著减少（p＜0.05）,转录水平没有明显差异,蛋白表达下调。根据以上结果,可以判定沉默ITGA5会使大肠杆菌粘附数减少。结合过失表达该基因的结果可以初步判定ITGA5是SADS-CoV感染仔猪后引起细菌的继发性感染,使大肠杆菌粘附数增加的关键因子。本研究为阐明肠道病毒感染机体后导致肠道菌群紊乱或致病菌大量定植的机制提供了研究模型,为疫病的防控提供了理论依据。
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