论文部分内容阅读
多酚类是植物次生代谢产物，具有独特的化学和生理活性，摄取一定量的多酚类物质能够有效地预防和控制疾病的发生。因此，多酚类已被称作人类健康的“第7营养素”，成为人类预防和治疗疾病的天然保键品和药物。巴拉圭茶（Ilex paraguarensis，Yerba Mate）是拉丁美洲国家广为流行的饮品，饮用历史悠久。研究表明，巴拉圭茶具有多方面的药理学活性，巴拉圭茶含有丰富的多酚类物质，其中咖啡酰基衍生物的含量高达10.71％，被认为可能是其许多功能的活性成分。但是，巴拉圭茶多酚类物质的分离纯化工艺及功能研究未见详细报道，严重地阻碍了以巴拉圭茶多酚类物质为原料的天然药物和功能性食品的研究开发。随着国际交流的不断深入，巴拉圭茶已经逐渐进入我国市场。本文对巴拉圭茶多酚类的提取、分离、纯化工艺进行了研究并对其单体化合物进行了结构鉴定。同时，对巴拉圭茶多酚类的抗氧化，降脂减肥等活性进行了研究。旨在为人们合理利用巴拉圭茶资源提供可靠的理论依据和技术支撑。1巴拉圭茶多酚的提取、分离纯化及化合物结构鉴定（1）建立了巴拉圭茶多酚类的提取和纯化工艺。采用70％乙醇，回流提取60min，回流温度80℃，料液比为1：10的提取工艺，对巴拉圭茶多酚类的提取效果较好，多酚类的质量分数为34.53％。乙酸乙酯是巴拉圭茶多酚类的最佳萃取溶剂，纯化后巴拉圭茶多酚（TIPP）的质量分数为80.64％。（2）通过考察8种大孔吸附树脂对巴拉圭茶多酚类的吸附与解吸性能，筛选了一种适合初步分离巴拉圭茶多酚的大孔吸附树脂HPD500，该树脂的吸附容量可达35.2mg／g。建立了大孔吸附树脂柱层析初步分离巴拉圭茶多酚的方法，经以乙醇溶液为解吸剂的梯度洗脱，巴拉圭茶多酚（TIPP）被分离成为TIPPA、TIPPB、TIPPC3个组分，样品回收率为75.17％。（3）选用Sephadex LH-20、HPD500树脂和聚酰胺柱色谱分别分离组分TIPPA、TIPPB、TIPPC，并对分离条件进行了优化研究，确定了3个组分的最佳分离工艺，并得到6个单体化合物：TIPPA1、TIPPA2、TIPPA3、TIPPB4、TIPPC5、TIPPC6。经结构鉴定，6个化合物分别为5-O-咖啡酰基-奎尼酸（5-O-caffeoylquinic acid，TIPPA1）、3-O-咖啡酰基-奎尼酸（3-O-caffeoylquinic acid，TIPPA2）、1-O-咖啡酰基-奎尼酸（1-O-caffeoylquinic acid，TIPPA3）、芦丁（rutin，TIPPB4）、3，5-二氧咖啡酰基-奎尼酸（3，5-di-O-caffeoylquinic acid，TIPPC5），4，5-二氧咖啡酰基-奎尼酸（4，5-di-O-caffeoylquinic acid，TIPPC6）。其中，1-O-咖啡酰基-奎尼酸为首次从巴拉圭茶中分离获得。2巴拉圭茶多酚降脂减肥活性的高通量筛选首次应用PPARs、FXR、3T3-L1为靶点的高通量筛选模型，研究巴拉圭茶多酚的降脂减肥活性，结果表明：（1）巴拉圭茶多酚是PPARs的双效激动剂。对PPARγ模型，巴拉圭茶多酚所有试验组中组分TIPPA的激活效果最好（激活倍数1.86）。对PPARβ／δ模型，化合物3，5-二氧咖啡酰基-奎尼酸的激活效果最好，其激活倍数为1.46，与茶多酚（1.46）的效果相当。（2）巴拉圭茶多酚试验组TIPPA、TIPPB、TIPPA1、TIPPA2、TIPPA3对FXR模型表现出抑制作用，组分TIPPA的抑制作用最强。（3）所有巴拉圭茶多酚试验组对PPARα及3T3-L1的作用效果均不显著。（4）巴拉圭茶多酚对多个筛选模型表现出激活或抑制作用，说明它有多条调控脂质代谢、能量代谢的途径。由此表明，多酚类是巴拉圭茶中具有降脂减肥功能的主要活性成分。3巴拉圭茶多酚体外抗氧化作用研究测定巴拉圭茶多酚类对·OH自由基、二苯代苦味酰自由基（DPPH）、O2-·自由基的清除率，同时用硫代巴比妥酸（TBA）法测定其对亚油酸自氧化的阻断作用。发现巴拉圭茶多酚类有较好的清除自由基及阻断亚油酸自氧化的能力。（1）除TIPPB组分外，复合组中清除羟自由基·OH的能力均较茶多酚和Vc强。清除DPPH的作用弱于茶多酚但强于Vc。在超氧阴离子O2-·体系中，多酚组分TIPPC的效果最好，其余介于茶多酚与Vc的清除能力之间。所有巴拉圭茶多酚的复合组阻断亚油酸过氧化的能力均弱于茶多酚。（2）巴拉圭茶酚类单体化合物的抗氧化活性研究表明，清除羟自由基·OH的能力，化合物TIPPC5、TIPPC6、TIPPA1、TIPPA2均较茶多酚和Vc强，TIPPA3与茶多酚的效能相仿，芦丁较茶多酚和Vc弱。清除DPPH的作用，芦丁较弱，与Vc的清除能力接近，其它的化合物均强于Vc弱于茶多酚。抗超氧阴离子O2-·体系中，二咖啡奎尼酸较茶多酚强，单咖啡奎尼酸弱于茶多酚的清除效果。所有从巴拉圭茶多酚中分离得到的单体化合物阻断亚油酸过氧化的能力均弱于茶多酚。（3）研究表明，相对于酚类的单体化合物，多酚复合组抗氧化能力有增强的趋势。除化合物5-O-咖啡酰基-奎尼酸对亚油酸过氧化反应的阻断作用稍强于化合物3，5-二氧咖啡酰基-奎尼酸之外，二咖啡奎尼酸的自由基淬灭能力和亚油酸过氧化反应阻断效果优于单咖啡奎尼酸。4巴拉圭茶多酚对淀粉酶活性的影响及抗菌活性研究（1）以α-淀粉酶及唾液淀粉酶活性抑制率为评价指标，研究了巴拉圭茶多酚对淀粉酶活性的影响。结果表明，巴拉圭茶多酚具有抑制淀粉酶活性的作用，其抑制唾液淀粉酶和α-淀粉酶活性的能力相当。在巴拉圭茶多酚复合组分中，总多酚（TIPP）及多酚组分TIPPB、TIPPC对淀粉酶活性均有抑制作用。其中，组分TIPPB的抑制作用最强。而组分TIPPA对淀粉酶没有抑制作用。在巴拉圭茶酚类单体化合物中，芦丁具有最强的淀粉酶活性抑制作用，浓度在2.5mg／mL时对α-淀粉酶的抑制率可达38.5％，对唾液淀粉酶的抑制率为33.1％。其次，化合物4，5-二氧咖啡酰基-奎尼酸具有较好的淀粉酶活性抑制作用，其它化合物对淀粉酶活性没有抑制作用。（2）采用体外抗菌法研究了巴拉圭茶多酚对大肠杆菌、沙门氏菌和链球菌的抗菌效果。巴拉圭茶多酚具有较强的抗菌活性，其对沙门氏菌的抗菌作用最强，优于茶多酚；对大肠杆菌的抗菌作用较强；对链球菌的抗菌作用稍弱。在巴拉圭茶多酚试验组中，TIPPB、TIPPC组分和总多酚（TIPP）对大肠杆菌和沙门氏菌的抗菌活性均较组分TIPPA强，而TIPPA组分对链球菌表现出最强的抗菌作用。