论文部分内容阅读
鳗弧菌和嗜水气单胞菌是两种导致海洋和淡水鱼类动物传染性疾病的重要病原菌,给水产养殖业带来巨大的经济损失。免疫接种被认为是一种最安全有效的疾病预防策略。在本实验室的前期工作中,我们通过表面展示系统成功的将嗜水气单胞菌的保护性抗原GapA34展示在鳗弧菌减毒活疫苗MVAV6203的外膜上,构建出了多价鳗弧菌活疫苗株MVAV6203A-1。注射免疫的保护率评价试验证明,该疫苗株可有效的诱导大菱鲆产生针对野生株鳗弧菌和嗜水气单胞菌的免疫保护力,具有潜在的商业应用价值。在本研究中,通过单因素筛选、Plackett-Burman Design实验和Response Surface Methodology实验对多价鳗弧菌活疫苗株N1VAV6203A-1的培养基进行了设计和优化,获得了新的适合于该疫苗株的培养基配方为：可溶性淀粉10g/L,氯化铵3g/L,酵母提取物3.34g/L,三氯化铁0.11 g/L,柠檬酸三钠0.22g/L,氯化钠34.6 g/L。在摇瓶发酵水平,获得的菌体干重为0.78g/L,优化效果并不明显；但是,单位菌体中抗原的总表达量和外膜展示量与优化前相比分别提高了179%(736μg/gbiomass)和44%(83μg/gbiomass)。此外,与本实验室常用的LB发酵培养基相比,单位菌体中抗原的外膜展示量提高了73%。在5 L分批发酵实验中,菌体干重达到1.71g/L,单位菌体中抗原的总表达量达到1138μg/gbiomass。确立了DO-stat法补料分批发酵策略,菌体干重达到5.98∥L,单位菌体中抗原的总表达量达到3384μg/gbiomass。在该发酵调控策略的基础上,加以控制pH,我们在30 L发酵罐中进行了放大,菌体干重达到5.61g/L,单位菌体中抗原的总表达量达到3283μg/gbiomass。此外,通过对多价鳗弧菌活疫苗株MVAV6203A-1的真空冷冻干燥保护剂的筛选和优化,获得了优化的保护剂配方为：半乳糖46g/L,海藻糖22.5g/L,脱脂奶粉101.5g/L,在此配方下冻干后菌体存活率达到最大值77.3%。