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禽传染性支气管炎（IB）是由禽传染性支气管炎病毒（IBV）引起的鸡的一种急性、高度接触传染性疾病。20世纪90年代以来，IB在国内相继爆发，流行十分广泛，给养禽业带来巨大经济损失。IBV防控的难点在于血清型、基因型众多，且不同血清型、基因型间没有交叉保护或者交叉保护很弱，长期的流行病学监控及选择针对本地区流行毒株的疫苗对 IB的防控具有重要的意义。 本实验室于2013-2015年期间从我国13个省市自治区发病鸡场送检病料中分离鉴定了290株IBV，并对分离株进行S1基因测序与分析，结果表明290株中除2株为变异株外，288株聚类与7个进化分支，即7个基因型。QX型和TW I型是我国目前主要的两种 IBV优势基因型，分别占分离毒株的44％和26.4%；其他五个基因型4/91型、CH III型、CH IV型、CH VI型和Mass型分别占13%、5.8%、1.7%、3.7%和4.4%。基因相似性分析发现，290株分离株之间核苷酸相似性在63.1%-100%之间，氨基酸相似性在60.2%-100%。TW I型分离株与国内常用疫苗株（Mass型、LDT3-A株、4/91株、YX10-D90株）S1基因相似性较低。重组分析发现，分离株中存在大量重组毒株，形成新的亚分支、亚型和变异株。 TW I型IBV于20世纪90年代后首先出现在我国台湾地区，近几年大陆地区TW I型分离株报道逐渐增多，但是对其生物学特征还不清楚。本研究选择4株大陆TW I型分离株（ZS13、GZ14、ZZ15和 LYG15株）进行研究，进行分离鉴定、全基因测序与分析、血清中和实验及商用疫苗免疫保护试验，并建立了qPCR检测方法。研究发现4株TW I型毒株仅在S1基因与台湾TW I型参考毒株序列相似度高，其他各基因及全基因与国内参考毒株相似度高，与台湾地区、国外参考毒株基因相似度低。全基因重组分析表明GZ14株并不是完全来源于台湾TW I型毒株，而是台湾TW I型分离株与大陆毒株重组产生。血清中和试验表明ZS13株、GZ14株与国内常用疫苗株血清型不同，ZS13株与GZ14株为同一血清型。商用疫苗免疫保护试验表明目前国内商用疫苗毒株对TW I型毒株的保护效果不佳。 本研究采用37℃ SPF鸡胚传代的方法对GZ14株进行致弱，以期获得一株疫苗候选毒株。经过一系列连续传代，GZ14株传代毒已适应鸡胚，造成明显的鸡胚病变，病毒滴度稳定。致弱评价试验发现，F5、F60代对雏鸡有较强致病力，而F80、F100代已对雏鸡没有致病力，接种后排毒时间缩短，在肾脏、气管中的病毒载量显著低于接种强毒F5组，差异显著，结果表明GZ14株F80、F100已实现传代致弱。对F60代和F80代进行全基因测序，与原代（F5）全基因序列比对发现，F80代全基因有17个核苷酸突变，造成15个氨基酸替换，3’-UTR34个核苷酸的缺失，推测传代过程中IBV基因组的核苷酸突变与缺失是造成GZ14株传代毒致病力下降的原因。