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随着现代显微镜技术的快速蓬勃发展,使用全内反射荧光显微镜(Total InternalReflection Fluorescence Microscopy,TIRFM)能观察并记录活细胞内纳米级的囊泡的运动和各种状态变换,同时使用图像处理的工程方法对这些动态过程进行分析,从而得到对生物生理过程和现象更深入透彻的解释。本研究首先利用TIRFM技术拍摄PC12细胞内囊泡的图像,然后利用计算机进行的定量分析与处理,为细胞物质转运机制的研究提供客观依据。
本研究对活细胞内大量囊泡的序列图像进行了处理与分析。首先对几十幅序列图像进行预处理,消除了噪声为下面的图像分析作准备。其次,本研究不仅识别和跟踪了囊泡的运动,而且研究了特征点识别方法--使用高斯点扩散函数重构出囊泡内荧光团的分布参数,从而得到每幅图中各个囊泡的位置信息。接着,按照基于图论的最优匹配算法,在每个点的邻域内搜索,连接序列图像之间的囊泡,描绘出此囊泡的运动轨迹,达到多轨迹跟踪的目的,另外也能计算出各种运动物理参数。同时利用高斯混合模型(Gaussian Mixture Model)和最大期望(Maximum Expectation,EM)算法,从一个荧光簇中重建出各个独立荧光点的参数。最后,在跟踪过程中引入卡尔曼滤波,减少了搜索的范围,从而有效地避免了背景噪声以及虚假噪声的干扰等。通过应用于实际数据,可以验证以上算法都能得到比较满意的结果,这将有助于生物生理方面研究。