【摘 要】
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目的:构建GFP-亨廷顿蛋白表达质粒,观察所构建质粒在哺乳动物细胞中的表达,研究外源性亨廷顿蛋白对细胞溶酶体酶的影响。方法:构建GFP-亨廷顿蛋白表达质粒: pcDNA3-GFP/Htt96
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目的:构建GFP-亨廷顿蛋白表达质粒,观察所构建质粒在哺乳动物细胞中的表达,研究外源性亨廷顿蛋白对细胞溶酶体酶的影响。方法:构建GFP-亨廷顿蛋白表达质粒: pcDNA3-GFP/Htt969-18(代表野生型亨廷顿蛋白N端969个氨基酸,含18个谷氨酰胺)和pcDNA3-GFP/Htt969-100(代表突变型亨廷顿蛋白N端969个氨基酸,含100个谷氨酰胺);采用脂质体转染法转染质粒;应用Western blot、免疫荧光法观察蛋白表达;采用免疫荧光法观察外源性亨廷顿蛋白过表达对细胞溶酶体酶Cathepsin B、D的影响。结果:经限制性内切酶酶切、聚合酶链式反应和测序证明质粒构建成功,并且亨廷顿蛋白表达质粒可以在哺乳动物细胞表达;质粒转染后亨廷顿蛋白过表达可显著增加溶酶体酶Cathepsin B、D水平。结论:外源性亨廷顿蛋白显著增加溶酶体酶Cathepsin B、D水平,提示自噬/溶酶体途径参与了亨廷顿蛋白的加工处理。
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