Fas相关磷酸酯酶-1(FAP-1)是近年来发现的一种重要的蛋白质酪氨酸磷酸酯酶，它的功能主要是与Fas分子的负性调节区(即Fas C末端的15个氨基酸残基)结合而抑制Fas的激活，还可直接减弱Fas从细胞内储备池向细胞表面的转移，阻止Fas介导的凋亡信号转导。同时FAP-1还可调控NF-κB、P75和caspase-8等凋亡相关因子的活性，经多种途径抵抗细胞凋亡的发生，是一种稳定的凋亡负调节分子。研究已发现FAP-1在多种恶性肿瘤中有异常表达，可能与肿瘤细胞出现的免疫逃逸与耐药现象有关。目前国内外关于FAP-1与卵巢癌发病之间的相关性研究较为少见，而运用FAP-1反义核酸作为卵巢癌治疗手段的文献尚无报道。本实验主要对FAP-1分子在卵巢癌组织与细胞中的表达情况及这种表达是否在卵巢癌的发病机制与耐药过程中具有功能性做了初步探讨。 实验分为四部分：1．通过免疫组织化学方法、Western blot和RT-PCR法检测了FAP-1分子在正常卵巢组织、卵巢良性肿瘤、卵巢恶性肿瘤组织及SKOV3、HO-8910、TC-1和3AO四种卵巢癌细胞株中的表达情况。2．用抗Fas单克隆抗体DX2在相同条件下诱导四种卵巢癌细胞株，通过MTT、FCM和Ho/PI荧光染色方法比较它们对Fas介导凋亡的敏感性，同时与FAP-1分子的表达 第四军医大学博士学位论文情况对照，了解FAP一l的表达水平与Fas介导凋亡的敏感性之间有无相关性。3.用FAP一1反义和正义寡核昔酸(FAP一1 ASODN和SODN)经脂质体包裹后瞬时转染FAP一1高表达的卵巢癌细胞株SKOV3，经Western blot、RT.PCR及MTT、FCM和Ho/Pl荧光染色等方法比较反义转染前后SKOV3细胞中FAP一1的表达水平及其对DXZ诱导凋亡的反应情况，反证FAP一1是否有助于降低细胞对Fas介导凋亡的敏感性。4.分别用FAP一1 ASODN、FAP一1 SODN、化疗药物卡铂及FAP一1 ASODN联合卡铂，以不同浓度和作用时间处理SKOV3细胞，应用MTT、FCM和DNA Ladder等方法检测各组的细胞周期、凋亡率与生长抑制率，了解FAP一1反义核酸是否与化疗药物卡铂具有协同治疗作用。 结果显示，FAP一l蛋白在卵巢交界性肿瘤与恶性肿瘤中有明显表达，在卵巢良性肿瘤中低表达，而在正常卵巢组织中无表达。且这种表达率随肿瘤的临床分期和病理分级的增商而增加，而与组织学分型和转移性等改变等无明显相关性。体外实验表明，FAP·1蛋白与mRNA在卵巢癌细胞株TC一1和3AO中无表达，而在SKOV3和HO一8910中呈阳性表达，尤以SKOV3细胞株的表达强度为最高。进一步比较还发现，FAP。1的表达强度与卵巢癌细胞对DXZ诱导凋亡的敏感性明显相关，FAP一1表达水平越高，相同条件下，细胞凋亡率越低，本实验选用的四株卯巢癌细胞中以SKOV3对DXZ诱导的凋亡最不敏感.当用FAP一IASODN封闭掉SKOV3细胞中的FAP一1 mRNA和蛋白表达后，相同条件下，SKOV3细胞的凋亡率与生长抑制率较封闭前明显增高(P<0.01，P<0.05)，提示FAP一1可以降低癌细胞对Fas介导凋亡的敏感性，促进了“Fas抵抗”现象及耐药现象的出现，而FAP一IASODN可以拮抗此效应。当用FAP一1 ASODN与卡铂联合作用于SKOV3细胞后，与单用卡铂组及单用ASODN组相比，相同条件下卡铂对癌细胞的诱导凋亡作用明显提高，同时达到卡铂作用峰值所需的时间 第四军医大学博士学位论文和浓度也降低，表明FAP一1 A 5 ODN与卡铂具有协同作用，有助于改善卵巢癌细胞的耐药性，有可能成为一种新型的化疗药物增敏齐日。 结论:本实验首次通过体内及体外实验证明，FAP·1分子在卵巢癌组织与SKOV3、HO一8910、TC一l和3AO四种卵巢癌细胞株中具有异常表达，且这种异常表达与卵巢癌细胞出现的抵抗凋亡、产生耐药的特性相关，促进了卵巢癌的发生与发展，提示FAP一1在卵巢癌的发病机制中具有积极作用。而FAP一1反义核酸可以封闭FAP一1分子的表达、增强癌细胞对凋亡的敏感性、拮抗耐药性的出现，同时与化疗药物卡铂联合作用具有一定的协同作用，对于消除恶性肿瘤出现的“Fas抵抗”现象和逆转耐药具有重要意义。所以加强对FAP-1分子的研究，寻找可靠的FAP一1活性抑制剂，可以为临床治疗卵巢癌提供理论指导与实验依据。