【摘 要】
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采用修改后的碱裂解法,从该室分离保存的具有广谱抗真菌活性的枯草芽孢杆菌Bs98中提取到一种约75kb的较大质粒pMG75.经BamHI完全酶切产生8个片段.从Bs98中筛选出抗药性菌Bs98
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采用修改后的碱裂解法,从该室分离保存的具有广谱抗真菌活性的枯草芽孢杆菌Bs98中提取到一种约75kb的较大质粒pMG75.经BamHI完全酶切产生8个片段.从Bs98中筛选出抗药性菌Bs98Ap(60)在含Amp120μg/ml LB培养液中仍生长,由此菌株经吖啶橙处理获得稳定的脱落Bs98Ap,在Amp5μg/ml平板上不生长,脱落株中不含质粒pMG75,对供试菌无抑菌活性.pMG75用原生质体转化Bs98Ap,获得转化化Bs98Ap(30),脱落株恢复了Amp抗性和抗菌活性.初步说明,pMG75上可能存在编码抗菌蛋白的基因.用BamHI酶切片段1-4分别连接转化JM109扩增,重组质粒用感受方法转化Bs98Ap,转化率约10<2>/μgDNA.获得的四种转化子,经酶切分析证实实重组质粒后测抑菌活性,其中含有片段4的转化子Bs2279显微微弱的抗菌活性.Bs2279质粒结构稳定性较好,分离稳定性差.该工作建立的两种遗传转化方法为进一步研究打下了基础.
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