随着基因组测序的完成,人们意识到仅靠基因组难以全面反映机体状态,机体生命活动规律的揭示有赖于蛋白质组学的研究。通过多维色谱或电泳方法的联用,人类已经能鉴定出1000多种蛋白,但很多蛋白仍难以检测,其中一个重要原因就是血清中蛋白质浓度相差迥异,高丰度蛋白很容易掩盖低丰度蛋白,造成低丰度蛋白检测困难。本文提出毛细管速差电泳的概念,使样品分离度的增大不再仅仅依赖于毛细管有效长度的增大或分离模式的改变,通过速差效应就可以达到目的。在本实验中,首先用圆二色光谱结合传统毛细管电泳优化出最佳分离条件,并考察了毛细管电泳分离度与进样量的关系,得出分离度与进样量的负相关性,从而为毛细管速差电泳在高丰度蛋白去除方面的应用提供理论基础。基于以上理论,用不同比例的标准蛋白混合物(溶菌酶:BSA=1:30,1:80,1:120,1:150)模拟低丰度蛋白和高丰度蛋白。在传统毛细管电泳中,由于BSA的掩盖使溶菌酶信号无法检测,应用毛细管速差电泳“割大留小”将大部分BSA去除,使溶菌酶信号得以显现并能够与剩下的小部分BSA达到基线分离。除了在去除高丰度蛋白方面的应用,毛细管速差电泳还可以增大样品间分离度,对于分离度较好的蛋白混合物(溶菌酶、β-乳球蛋白、核糖核酸酶A),通过速差效应可以使分离度提高10倍以上;对于分离度不大的混合物(溶菌酶、BSA),通过毛细管速差电泳“割大留小”或“多重切割”将一部分纯品分离出去,减小了混合部分样品宽度,相当于减小了混合程度,使溶菌酶与BSA的分离度大大增加;对于一些仅仅有一点分离趋势的样品混合物(β乳球蛋白与BSA),利用“多重切割”同样可以缩小区带宽度,改善分离度。