【摘 要】
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在当今高度流动、相互依存和联系密切的情形下,感染性疾病以非常快的速度传播,对全球公共卫生构成严重的威胁。除了研发抗感染新型药物,有效监控感染过程也是控制感染性疾病
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在当今高度流动、相互依存和联系密切的情形下,感染性疾病以非常快的速度传播,对全球公共卫生构成严重的威胁。除了研发抗感染新型药物,有效监控感染过程也是控制感染性疾病的关键。核酸适配体(aptamer)是通过指数富集配体系统进化技术(SELEX)从寡核苷酸文库中筛选得到的一种单链寡核苷酸分子,它通过与靶分子特异性结合影响靶分子的生物活性和生物学功能。目前针对病原微生物的核酸适配体筛选和应用研究备受关注,它不仅应用于疾病的诊断,还在病原与宿主的相互作用研究中发挥了特定的作用。本研究建立了核酸适配体筛选和应用平台,以番鸭细小病毒(MDPV)全病毒和水貂阿留申病毒(AMDV)VP2蛋白为靶标,筛选出了高亲和力、特异性良好的核酸适配体,并分别建立了针对MDPV的Label-free金纳米检测方法和针对AMDV的双夹心ELONA检测方法。通过临床样品检测,所建立的方法的特异性、敏感性、重复性良好。核酸适配体的抑制AMDV增殖活性结果表明,ADVa012在工作浓度达到4μM时抑制率可达47%,半衰期为31.68 h,且不会对CRFK细胞的增殖产生影响,结合位点分析结果显示ADVa012与VP2蛋白结合的优势区域位于P4(aa397-aa474)区域。以上结果表明,本研究成功建立了针对不同靶标(全病毒和蛋白)的核酸适配体筛选技术平台,成功筛选了 MDPV和AMDV VP2蛋白的核酸适配体,建立了基于核酸适配体的高灵敏检测方法,也证明了筛选的ADVa012核酸适配体具有明显的抗病毒作用。
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