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第一部分人尿激酶用于雄性小鼠免疫避孕的免疫方法和效价分析目的:建立利用人源尿激酶(uPA)分子作为抗原诱导雄性昆明小鼠产生抗人uPA多克隆抗体的实验方法,检测所用免疫方法的有效性及稳定性。方法:将成年雄性昆明小鼠随机分为5组:空白对照组(不施予任何处理)、佐剂对照组(100μl生理盐水+等量佐剂乳化后皮下多点注射);uPA低剂量免疫组(20μg/100μl uPA溶液100μl +等量佐剂乳化后皮下多点注射)、uPA中剂量免疫组(40μg/100μl uPA溶液100μl +等量佐剂乳化后皮下多点注射)、uPA高剂量免疫组(80μg/100μl uPA溶液100μl +等量佐剂乳化后皮下多点注射)。每2周免疫1次,于第3次免疫后1周取其尾动脉血清以酶联免疫吸附实验(ELISA)检测各组抗体效价,设PBS对照便于比较背景溶液OD450值。以上方法在不同批次雄鼠中重复3次。结果:以ELISA法测出血清OD450值间接反映血清中抗体相对含量。uPA低、中、高剂量免疫组与空白、佐剂对照组相比较,抗人uPA多克隆抗体相对含量增加,差异具有统计学意义(P<0.05);随着uPA免疫剂量的增加,诱导产生的抗体相对含量有下降趋势,差异无统计学意义(P>0.05);uPA低、中、高剂量免疫组血清中抗人uPA多克隆抗体效价均达到1:10240以上。结论:建立了利用人源uPA分子作为抗原诱导雄性小鼠产生抗人uPA多克隆抗体的实验方法,使用该法免疫3次即可在雄性小鼠体内产生稳定的抗体效价。第二部分人尿激酶免疫雄性小鼠对其生殖能力的影响实验一人尿激酶免疫雄性小鼠对其交配能力和生育能力的影响目的:通过人源uPA分子免疫后雄性小鼠的交配实验,检测免疫后雄鼠交配能力和生育能力的改变。方法:动物分组和处理参照第一部分。于免疫3次后分别将各组雄鼠与处于发情期或发情前期的成年雌鼠进行合笼,次日查阴栓或镜下检查阴道细胞灌洗涂片,计算各组雄鼠的交配成功率;于交配成功后第14天将雌鼠解剖,观察各组雄鼠致雌鼠妊娠率并计算孕鼠的平均活胎数。结果:各组雄鼠的交配成功率无明显差异(P>0.05);uPA低、中、高剂量免疫组雄鼠的致雌鼠妊娠率以及平均活胎数与对照组相比显著降低,差异有统计学意义(P<0.001),空白和佐剂对照组之间未见明显差异(P>0.005)。结论:采用人尿激酶免疫雄性小鼠后雄鼠交配能力无明显改变但是生育能力显著下降。实验二人尿激酶免疫雄性小鼠对其精子功能的影响目的:对人源uPA分子免疫后雄性小鼠的附睾尾精子进行各项检测,评价免疫对雄性小鼠精子功能的影响。方法:动物分组和处理参照第一部分。以人源uPA免疫雄性小鼠3次后,检测其性腺器官指数和精子功能(活动率、存活率、低渗肿胀率、精子密度、爬高试验、uPA诱导产生趋化运动精子数、体外受精率等)各项指标的改变。结果:①性腺脏器指数:各组雄鼠性腺脏器指数无显著性差异(P>0.05);②精子存活率:uPA低、中、高剂量免疫组雄鼠附睾尾精子存活率比对照组明显降低,差异具有统计学意义(P<0.05);③精子活动率:uPA低、中、高剂量免疫组雄鼠附睾尾精子活动率比对照组显著降低,差异具有统计学意义(P<0.05);④精子低渗肿胀率:uPA低剂量免疫组雄鼠附睾尾精子低渗肿胀率比对照组明显增高,差异有统计学意义(P<0.05),而uPA中、高剂量免疫组附睾尾精子低渗肿胀率与对照组相比没有统计学差异(P>0.05);⑤精子密度:uPA低、中、高剂量免疫组雄鼠附睾尾精子密度比对照组明显降低,差异具有统计学意义(P<0.05);⑥精子爬高试验:各组雄鼠附睾尾精子爬高试验中爬高距离相比,无统计学差异(P>0.05);⑦uPA诱导产生趋化运动精子数:uPA中、高剂量免疫组雄鼠附睾尾精子经uPA诱导产生趋化运动精子数明显减少(P<0.05),而低剂量免疫组没有明显改变(P>0.05);⑧体外受精率:uPA低、中、高剂量免疫组雄鼠附睾尾精子体外受精率比对照组明显降低,差异具有统计学意义(P<0.05),免疫剂量的高低对体外受精率没有明显影响。结论:以人uPA分子免疫雄性小鼠后,雄性小鼠各项精子功能下降。