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背景和目的
恶性淋巴瘤是人类常见的十大恶性肿瘤之一,近年来恶性淋巴瘤的发病率逐年上升,其中弥漫大B细胞淋巴瘤(diffuse large B cell lymphoma,DLBCL)是非霍启金淋巴瘤的一个亚型,占非霍奇金淋巴瘤的30-40％[1],尽管近年来传统的化疗方法有了很大的进步,包括增加CHOP方案的剂量密度,联合抗CD20单克隆抗体(利妥昔单抗,美罗华),但是仍然有一大部分病人死于该病的进展。因此寻找弥漫大B细胞淋巴瘤患者发病的分子机制,治疗靶点和预后相关标志物显得至关重要。
PTEN是一个强有力的肿瘤抑制基因,其主要行使针对磷脂和蛋白的双靶点特异性磷酸酶功能。PTEN行使磷脂脱磷酸功能的主要底物是第二信使PIP3(phosphatidylinositol-3,4,5-trisphosphate),使其脱磷酸成:PIP2(phosphatidylinositol-4,5-trisphosphate),拮抗P13K.的作用,因此是PI3K/AKT通路的重要拮抗因子。P53抑癌基因位于17p,弥漫大B细胞淋巴瘤中p53的突变很少作为一个独立事件发生,但是有研究表明其突变与患者的预后差有关[2,3,4,5]。PTEN和p53之间存在相互联系和作用。PTEN通过与p53的自然联系增加p53的稳定性和与DNA绑定的功能[6]。近来有研究发现PTEN与核内p300的天然联系有助于保持p53基因应对DNA损伤的乙酰化状态。这些研究均说明PTEN和p53通路之间存在相互协调和补充,也有可能提供肿瘤治疗和预后的意义。本实验在观察弥漫大B细胞淋巴瘤患者PTEN和p53蛋白表达与临床意义的过程中发现。PTEN蛋白与患者的临床特征及预后无相关性,但是p53突变与患者的分子分型,无病生存和总生存相关,并且PTEN的状态不影响p53的预后意义。
方法：
收集我院2002.1-2007.1年诊治的弥漫大B细胞淋巴瘤患者的临床资料和病理蜡块,共62例。采用免疫组化方法检测肿瘤组织中PTEN蛋白和p53蛋白的表达情况,根据CD10,MUM-1和BCL-6的表达情况将患者分为生发中心型(germinal central type,GCP)和非生发中心型(Non-germinal centertype,Non-GCP),分别分析PTEN和p53与患者IPI评分,分子分型,初始治疗反应,无进展生存和总生存之间的关系。并且根据PTEN和p53蛋白表达情况将患者分为四组,分别为PTEN+/p53+,PTEN+/p53+,PTEN+/p53-,PTEN-/p53-,统计分析四组不同状态患者的无进展生存和总生存。
选择p53突变并且对阿霉素耐药的弥漫大B细胞株(SLJDHL-4),观察甲氨蝶呤(MTX),阿糖胞苷(Ara-c),利妥昔单抗(Rituximab)对细胞增殖的影响。并采用Weaten Bloting实验检测利妥昔单抗的作用机制。
应用SPSS13.0统计学软件分析实验数据,a=0.05作为检验水准。将实验数据进行x2检验和Kaplan-Merie生存分析、Log-Rank差异显著性检验。
结果：
1.62例弥漫大B细胞淋巴瘤患者中有23例PTEN蛋白表达阴性,占37.1％,PTEN蛋白主要在胞浆表达,只有12例患者PTEN蛋白核内有表达,占19.4％。统计学分析PTEN蛋白阳性组和阴性组患者的IPI评分,分子分型,初始治疗反应(CR或No CR)无统计学意义(p>0.05),并且分析PTEN蛋白表达与患者的无进展生存和总生存的关系,结果仍然没有统计学差异(p=0.483)。PTEN蛋白核表达与上述特征之间也无统计学意义。
2.62例患者中有30例患者p53蛋白阳性,占48.4％,统计学分析表明p53表达与患者的分子分型,初始治疗(对CHOP为基础的方案)反应有统计学意义(p<0.05),而患者的IPI评分与p53突变无统计学意义(p>0.05),并且生存分析表明两组之间的无进展生存时间和总生存时间均存在统计学意义(p=0.005；p=0.006)
3.p53突变和PTEN缺失之间无相关性(p=0.553)。多因素生存分析结果p53突变与患者的预后相关(p=0.006),而PTEN缺失不是影响因素(p=0.634)。
4.选择SUDHL-4细胞株作为体外实验的模型,观察加入阿霉素,甲氨蝶呤和阿糖胞苷后细胞的增殖情况,结果发现和阿霉素(ADM)相比,大剂量的甲氨蝶呤(>100ug/ml)和阿糖胞苷(>80ug/ml)均对细胞产生明显的抑制作用,这种抑制作用不通过改变Bcl-2和p53蛋白的表达实现。并且50ug/ml的利妥昔单抗可以显著增加阿霉素(0-200ng/ml)对SHDHL-4细胞的抑制作用。这种作用是通过下调Bcl-2蛋白的表达而不是p53实现。
结论：
1.PTEN蛋白表达与弥漫大B细胞淋巴瘤患者的临床特征及预后均无相关性。
2.p53蛋白表达与患者分子表型及预后有相关性。
3.弥漫大B细胞淋巴瘤中p53突变与PTEN缺失不是相互排斥的,并且PTEN的状态不影响p53的预后意义。
4.Hyper-CVAD方案(包含大剂量甲氨蝶呤和阿糖胞苷)有希望成为p53突变的弥漫大B细胞淋巴瘤患者较好的选择治疗方案。并且抗CD20单克隆抗体利妥昔单抗的应用克服了弥漫大B细胞淋巴瘤患者对CHOP方案中阿霉素的耐药,从而改善后患者的生存情况。