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目的:表达CJ PEB1重组蛋白，制备CJ PEB1蛋白的单克隆抗体及多克隆抗体，为建立血清学方法检测CJ感染创造了条件。
方法:1、PEB1重组蛋白的获得及SDS-PAGE分析<[1]>．取工程菌E. coli BL21(DE3)培养，加入IPTG诱导表达CJ PEB1重组蛋白。离心收集菌体，超声破碎，离心收集上清，通过镍琼脂糖凝胶层析柱纯化，得到高纯度的PEB1蛋白溶液，将其转至透析袋中透析并经聚乙二醇浓缩后， BCA法进行蛋白定量，分装保存备用，并进行SDS-PAGE分析。
2、PEB1重组蛋白单克隆抗体的制备及鉴定：以PEB1蛋白溶液与等体积的佐剂完全乳化作为免疫原常规免疫BALB/C小鼠。待间接ELISA检测小鼠血清效价满意后，无菌取其脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0进行融合，建立杂交瘤细胞株。应用间接ELISA法和双向琼脂扩散试验检测了杂交瘤细胞诱生的腹水的抗体效价。Western-blot和玻片凝集试验检测抗体特异性。
3、PEB1重组蛋白多克隆抗体的制备及鉴定：以PEB1蛋白溶液与等体积的佐剂完全乳化作为免疫原免疫新西兰兔，共免疫4次。末次免疫后1W采血测血清效价，再经1W心脏采血，收集血清，盐析法粗提IgG，应用间接ELISA法和双向琼脂扩散试验检测抗体效价。通过westem-blot和玻片凝集试验检测抗体特异性。
结果:1、表达的蛋白通过镍琼脂糖凝胶层析柱纯化后，经SDS-PAGE鉴定，蛋白质分子量大小与预计的理论值相符，PEB1重组蛋白纯度高。
2、通过间接ELISA法检测两株杂交瘤细胞诱生的腹水的抗体效价分别为1:8×10<4>(1D<,7>A<,5>株)和1:5×10<,4>(5G<,2>B<,3>株)，双向琼脂扩散试验检测效价均为1:8。经Western-blot鉴定，两株杂交瘤细胞分泌的抗体均与PEB1蛋白特异性地结合。玻片凝集试验显示两株杂交瘤细胞诱生的腹水与CJ菌液混合出现凝集现象，而与大肠杆菌、痢疾杆菌、伤寒杆菌等菌菌液混合均未出现凝集现象。小鼠单抗分型试剂盒检测所得两株杂交瘤细胞分泌的抗体的亚型分别为IgG1和IgG3。经染色体检测，两株杂交瘤细胞的染色体数目分别为100±5和97±5。
3、通过间接ELISA法检测经盐析法粗提的兔IgG抗体的效价为1:2×10<4>，双向琼脂扩散试验检测效价为1:8。经Western-blot鉴定，经盐析法粗提的兔IgG抗体与PEB 1蛋白特异性地结合。玻片凝集试验显示经盐析法粗提的兔IgG抗体与CJ菌液混合出现凝集现象，而与大肠杆菌、痢疾杆菌、伤寒杆菌等菌菌液混合均未出现凝集现象。
结论:通过诱导培养基因工程菌peblE.coli BL21(DE3)高效表达基因重组蛋白并经镍琼脂糖凝胶层析柱纯化后获得高纯度的PEB1重组蛋白；以纯化的PEB1重组蛋白免疫BALB/C小鼠，利用淋巴细胞杂交瘤技术成功建立了2株稳定分泌单抗的杂交瘤细胞株，这两株杂交瘤细胞分泌的单抗通过间接ELISA法、双向琼脂扩散试验、Western-blot和玻片凝集试验检测，所获得的单抗效价高，特异性好；运用纯化的CJ PEB1重组蛋白免疫新西兰兔，获得效价理想且特异性好的多克隆抗体。