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本文利用乙醇-CMC-Na平板进行初筛,从不同材料中筛选产耐酒精纤维素酶的菌株。经过摇瓶发酵复筛,对产酶较高的菌株进行形态观察、生理生化测定及16S rDNA基因序列的同源性分析,获得一株产酶稳定的枯草芽孢杆菌Lys-1249。经产酶条件的正交优化,菌株及其所产的纤维素酶耐受酒精程度分析,菌株纤维素酶酶系的组成分析,并将该菌株纤维素内切酶组分经胰蛋白酶酶切,其片段的一级质谱信息经swissprot数据库鉴定,对与数据库中匹配较好的片段进一步进行二级质谱鉴定；同时对菌株纤维素酶系相关信息与Uniprot蛋白质数据库进行了比较分析。本文得出如下主要结论：1、通过产酶条件优化,表明菌株Lys-1249在麸皮2.0%,蛋白胨0.6%,K2HPO40.1%, MgSO4·7H2O 0.05%, FeSO4·7H2O 0.02%, MnSO40.01%,培养基初始pH 7.0,培养温度37℃,发酵周期48h条件下,其耐酒精纤维素酶活力达到158.54U/mL。该菌株在6.0%乙醇培养基中生长良好；该菌株纤维素酶在乙醇6.0%-CMC-Na 1.0%的底物中活性保持65.95%。2、纤维素酶通过活性电泳分离纯化后,将活性胶平铺CMC-Na平板,可以通过检测水解底物透明条带,从而建立一种鉴别该纤维素酶酶系的组分可行方法,该方法具有直观(直接观察水解透明条带),灵敏(可以检测到0.1-0.2μg/mL内切酶蛋白含量)的特点。通过该方法,发现菌株Lys-1249有3个内切酶组分,分别为p1, p2, p3, 三者均只有一种亚基,其中p1的分子量为65.1Ku, p2的分子量为43.7Ku,p3的分子量为48.0Ku。菌株Lys-1249内切酶组分p1, p2, p3经胰蛋白酶酶切,其片段的一级质谱、二级质谱信息经swissprot数据库鉴定分析,同时在Uniprot蛋白质数据库进行了比较,发现菌株Lys-1249内切酶组分p 1, p2与Bacillus subtilis (strain 168) Glucose-6-phosphate isomerase匹配性好,采用打分法分析相似度具有显著性。未发现与Lys-1249内切酶组分p3匹配性好菌株相关蛋白信息。