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青花椒是指芸香科植物青椒的干燥成熟果皮,中国是世界上花椒种植面积最大的国家之一,花椒果皮作为调味品,是我国人民十分喜欢的食用香辛料。花椒除了果皮可以作为食用和药用外,其它部分如果梗、种籽,以及根、茎、叶均可入药治病。近年来,青花椒具有较高的经济价值和生态价值,我国青花椒种植速度递增,有关青花椒方面的研究越来越多,但是作为一种传统的香辛料,对其营养成分研究的居多,但对其品种的鉴定却没有。RAPD(Random Amplified Polymorphic DNA)技术是在PCR技术基础之上的一种分子标记的方法技术,除继承了PCR技术的优点外,RAPD技术可以对所研究的物种在没有任何分子生物学的基础上进行DAN多态性的分析。因具有检测效率高、样品用量少、灵敏度高、花费少、费时少等一系列优点,现已得到广泛的应用。本文对五个产地的青花椒的挥发油含量进行对比分析,并采用RAPD技术分析花椒的亲缘关系,其研究结果为青花椒品种鉴定和质量标准提供了实验依据。本实验的主要研究内容及结论如下:1、五个产地青花椒挥发油含量及成分分析本实验采用水蒸气蒸馏法提取五个产地的青花椒中的挥发油,并采用GC-MS对其挥发油的成分进行了分析。结果表明,产地不同,青花椒的挥发油的含量也不同,即产地的差异导致含量存在一定的差异。在这五个产地中,金阳产地的青花椒果皮中挥发油含量最高,江津产地的青花椒次之。在对五个产地的青花椒的挥发油的主要成分分析时,五个产地的青花椒主要峰群的整体图貌基本一致,相似度较高,主要存在的共性成分是桧烯、β-蒎烯、月桂烯、柠檬烯、芳樟醇。2、RAPD最优条件的选择试验选用30条随机引物分别对五个产地的青花椒进行PCR-RAPD试验,选取了12条同时适合于五个产地青花椒可以进行多态性分析的引物,并对RAPD试验条件进行了优化。实验结果表明RAPD最优反应体系的参数为:10×Taq Buffer (Mg2+Free)2.5uL,MgCl2(25mM)2uL,dNTP (each2.5mM)2uL,Taq酶(5u/μL)0.25uL,Primer (20pmol/μL)1uL,Genomic DNA (100ng/μL)0.5uL,ddH2O15.75uL。循环参数为:95℃预变性5min,94℃变性1min,38℃复性2min,72℃延伸3min,35个循环,72℃保温10min。3、RAPD聚类分析根据电泳后获得的DNA片段图谱,由NTSYS软件进行聚类分析,结果表明:金阳青花椒与昭通青花椒属于一类,仁寿青花椒和江津青花椒上它们属于相同的一类,而洪雅青花椒自成一类;洪雅青花椒要与仁寿青花椒的亲缘关系要近一些,说明青花椒的生长环境的气候、温度对其都有一定的影响,该方法可以用于青花椒的品源鉴定。