莫能菌素多克隆抗体制备及应用

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本文合成莫能菌素结合抗原,制备高特异性抗体,改变包被原的结构,以提高酶联免疫吸附测定(enzyme-linkedimmunosorbentassay,ELISA)灵敏度,并在成功研制多克隆抗体基础上,初步进行了应用。旨在建立一种简便、可信、快速、灵敏的莫能菌素残留分析方法,以对组织中莫能菌素残留进行监控,保证畜禽产品的质量。 1.莫能菌素抗原制备 生产中制备的莫能菌素以钠盐形式存在,没有直接与选用的载体蛋白质(BSA、OVA)偶联的基团,因此不能直接用于人工抗原的合成,必须加以修饰形成含羧基的物质才能合成人工抗原。本试验采用琥珀酸酐法合成莫能菌素-琥珀酸酐衍生物(MON-HS),并通过薄层层析进行鉴定。采用混合酸酐法将莫能菌素-琥珀酸酐(MON-HS)与载体蛋白(BSA,OVA)共价偶联,合成免疫抗原(Mon-HS-OVA),合成的免疫原通过SDS-PAGE电泳法进行鉴定,并通过蛋白染色法和香草醛法测得MON与BSA的结合比为14.7:1。 2.抗莫能菌素多克隆抗体制备 用合成的Mon-HS-BSA免疫新西兰大白兔,多次免疫后取血清,经间接ELISA法测定抗体效价为1:25600(2号)。以MON浓度的对数为横坐标,抑制率为纵坐标,作标准曲线,用这种方法确定的I50为32.4ng/ml,以90%抑制率为其灵敏度,灵敏度为2.75ng/ml。为检验抗体的特异性,用盐霉素,海南霉素,磺胺间甲氧嘧啶等3种药物作为竞争抗原,做ELISA,结果显示与这3种药物没有交又反应。 3.抗莫能菌素多克隆抗体应用 为了验证实际检测效果,通过样品给药实验,证实了可以用ELISA法测定鸡蛋中的MON。
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