【摘 要】
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该文研究了一个在食管癌组织及细胞系中显著下调的基因Clorf10转录起始位点上游2kb的序列,以探讨其启动子区域的转录调控功能.我们首先将Clorf10转录起始位点上游-2,014至下
【出 处】
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中国协和医科大学 北京协和医学院 中国医学科学院 清华大学医学部
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该文研究了一个在食管癌组织及细胞系中显著下调的基因Clorf10转录起始位点上游2kb的序列,以探讨其启动子区域的转录调控功能.我们首先将Clorf10转录起始位点上游-2,014至下游+188共2202bp的基因组DNA序列构建入pGL3-Basic质粒中,测序后Blast比较同源.确定插入序列正确后,以此质粒为模板,转录起始位点下游+26bp处为3′端,PCR扩增一系列Clorf10上游启动子5′端梯度缺失片段(共8条);以转录起始位点上游-1,052bp为5′端,PCR扩增2条3′端梯度缺失片段.将这10个片段构建入pGL3-Basic载体,得到10个含有不同Clorf10启动子区域的质粒(pGL3-P1~P10).采用双荧光素酶报告基因测试系统()检测pGL3-P1~P10在EC9706和M细胞中的启动子活性,结果显示该基因关键启动子位于-173至-110之间,-2,014至-1,053之间有沉默子.
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