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葡萄膜炎是一大类累及葡萄膜、视网膜、视网膜血管、视乳头及玻璃体的眼病，常导致眼组织的严重破坏以致视功能的显著下降或丧失。葡萄膜炎的病因复杂，类型繁多，是世界范围内的常见眼病之一。其一重要特点是好发于青壮年，并且不少类型为慢性或反复发作型，炎症难以控制，反复发作及长期存在的炎症最终导致眼组织结构破坏和功能的丧失，给社会和家庭带来严重危害。在西方国家，葡萄膜炎所致盲目占所有致盲眼病的10％以上；国内报道，4％-10％的盲目是由葡萄膜炎导致的，占致盲眼病的第3-7位，并且其中相当一部分是不可治盲。葡萄膜炎之所以会造成如此严重的后果，最主要的原因是其确切发病机制不完全清楚，从而缺乏理想的预防措施和有针对性的治疗方法。因此，探索葡萄膜炎的发病机制一直是葡萄膜炎基础研究的重点。
迄今为止，细菌、病毒、真菌、螺旋体等微生物感染、弓形体等寄生虫感染、外伤、遗传、环境影响等等诸多因素均被报道可能与葡萄膜炎的发生有关。但是越来越多的研究表明，自身免疫诱导或参与了葡萄膜炎的发生、发展过程，提示葡萄膜炎是一类自身免疫性疾病。明确诱导自身免疫反应的自身抗原特别是其致病表位是研究自身免疫性疾病发病机制的基础。眼组织中存在十余种具有致葡萄膜炎活性的蛋白，包括视网膜S抗原、光感受器间维生素A类结合蛋白、黑色素相关抗原等。近年来还不断有新发现的具有致葡萄膜炎活性的自身抗原见诸报道。在众多葡萄膜炎自身抗原中，视网膜S抗原研究得最为详尽。用S抗原免疫易感动物，或用S抗原特异性T细胞过继转移给易感动物，可以诱导大鼠、小鼠、豚鼠及灵长类动物发生类似于人类葡萄膜炎的实验性自身免疫性葡萄膜炎；用S抗原蛋白或其来源的多肽可诱导多种葡萄膜炎病人产生淋巴细胞增殖反应。但是，既往研究多用牛视网膜S抗原作为自身抗原进行体内外实验，并且在人类葡萄膜炎中S抗原优势免疫表位尚未明确。虽然视网膜S抗原具有高度保守性，但是牛S抗原的致病表位未必等同于人的免疫表位。对于研究患者的自身免疫反应及鉴定人类葡萄膜炎自身抗原优势免疫表位，必须以人的蛋白作为自身抗原进行实验。
为此，本课题利用人视网膜S抗原重叠肽，研究了Behcet病患者外周血中视网膜S抗原特异性T细胞的频数、表型及功能特征。我们首先合成40条覆盖人视网膜S抗原序列全长的重叠肽，每条肽长20个氨基酸，依次重叠10个氨基酸。分离活动期、静止期Behcet病患者及健康志愿者的外周血单个核细胞(PBMC)，体外经视网膜S抗原混合肽刺激，应用酶联免疫斑点试验(ELISpot)检测IFN－γ分泌细胞以鉴定外周血T细胞对S抗原的反应性，并计量S抗原特异性T细胞的频率；同时用酶联免疫吸附试验(ELISA)从整体水平证实Behcet患者外周血中S抗原特异性细胞免疫反应；采用流式细胞检测技术(FACS)检测S抗原特异性T细胞的表型特征；用ELISA法检测细胞培养上清中IFN-γ、IL-2、TNF-α、IL-4、IL-17的水平，分析S抗原特异性T细胞的功能特征。本文第一部分的结果显示，56.5％活动期、25％静止期Behcet病患者的PBMCs对视网膜S抗原的刺激产生不同程度应答，正常人对视网膜S抗原的刺激均无反应，活动期及静止期患者视网膜S抗原特异性T细胞的频数无显著性差异，但是抗原特异性T细胞的频数较低。PBMCs对视网膜S抗原混合肽的反应性在单细胞水平和整体水平保持一致。FACS结果显示，活动期Behcet病患者的视网膜S抗原特异性细胞中64.3％为活化的记忆性CD4+T细胞。在视网膜S抗原混合肽作用下，PBMCs中TNF-α的产生明显上调，IL-17的分泌水平无显著性差异，IL-2、IL-4的表达量低于检测水平。提示S抗原特异性T细胞在Behcet病的发病过程中，主要通过分泌Th1型细胞因子发挥病理作用。
本文的第二部分利用对S抗原混合肽的刺激能产生阳性反应的活动期Behcet病患者，进一步用IFN-γELIspot法检测其外周血T细胞对40个S抗原单肽的反应谱，并筛选视网膜S抗原的Th1细胞优势免疫表位。结果显示，Behcet病中视网膜S抗原的T细胞表位肽反应谱呈高度异质性。表现为：每个Behcet病患者均能对多个视网膜S抗原单肽的刺激发生反应，各个患者的优势表位肽不完全一致。在我们鉴定出的3个主要的S抗原Th1细胞优势表位肽P31(氨基酸aa301-320)，P35(aa341-360)和P40(aa391-405)中，P40可能是Behcet病性葡萄膜炎的疾病相关肽，但是每个优势反应肽并不能诱导所有患者都产生优势反应。另外，当将患者按不同病程分组分析各自的S抗原表位肽反应谱时，我们发现总体而言短病程的患者对S抗原单肽的反应性较长病程患者强，随着病程延长，Behcet病患者的S抗原优势反应肽发生分散漂移。
综上所述，本研究证实了视网膜S抗原对大多数Behcet病患者具有免疫原性。S抗原特异性细胞多为记忆性CD4+T细胞、以较低频率存在于部分Behcet病患者的外周血中，并通过分泌Th1型细胞因子在葡萄膜炎的复发过程中发挥效应。Behcet病患者对视网膜S抗原表位肽的反应谱具有高度异质性，P40为其最具潜力的疾病相关肽。该研究为深入探讨视网膜S抗原介导的自身免疫机制在人类葡萄膜炎中的作用奠定了基础，为建立免疫耐受疗法或抗原特异性免疫疗法治疗葡萄膜炎提供了理论依据。