端粒在AsO诱导L02及HepG2细胞凋亡及增殖中的作用

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目的:探索端粒、端粒结合蛋白、端粒酶活性及端粒逆转录酶基因表达在As2O3诱导L02和HepG2细胞凋亡的作用。 方法:体外培养细胞,流式细胞术观察12μmol/ L As2O3对L02和HepG2细胞的诱导凋亡作用,应用以PCR为基础的端粒重复序列扩增(TRAP-PCR)银染法检测端粒酶活性;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测端粒逆转录酶(hTERT)mRNA表达;0.625μmol/LAs2O3处理L02和HepG2细胞2w、4w、6w,染色体核型分析检测细胞染色体畸变;检测端粒逆转录酶(hTERT)mRNA和端粒酶活性表达。Western-blot检测As2O3诱导细胞凋亡及增殖过程中端粒结合蛋白、核增殖抗原(PCNA)蛋白表达变化。 结果:流式细胞术结果显示,12μmol/L As2O3处理L02细胞24、48、72h,凋亡率分别为5.81%±1.00、8.65%±2.05、13.15%±1.06(P<0.05);处理HepG2细胞24、48、72h后,凋亡率分别为9.74%±1.22、21.89%±2.14、42.72%±0.83,均显著高于对照组0.98%±0.11(P<0.05);RT-PCR分析端粒逆转录酶基因(hTERT mRNA)表达,结果显示12μmol/L As2O3处理L02和HepG2细胞72h,L02细胞hTERT mRNA 的表达消失,HepG2细胞hTERT mRNA表达较对照组明显下降(P<0.05)。以PCR为基础的端粒重复序列扩增(TRAP-PCR)银染法检测端粒酶活性表达,结果显示12μmol/L As2O3处理L02细胞24h、48h端粒酶活性开始下降,72h无明显端粒酶活性(P<0.05);处理HepG2细胞24h、48h端粒酶活性无明显改变,72h端粒酶活性明显受到抑制(P<0.05)。Western-blot分析端粒结合蛋白表达,结果显示12μmol/L As2O3处理L02和HepG2细胞72h端粒结合蛋白TRF1、TRF2表达较对照组上调(P<0.05)。0.625μmol/LAs2O3处理L02和HepG2细胞6w,染色体端-端融合及双微体的畸变率较对照组增加,差异有显著性(P<0.05);hTERT mRNA及端粒酶活性的表达较对照组增加(P<0.05)。Western-blot分析端粒结合蛋白及核增殖抗原表达,结果显示0.625μmol/L As2O3处理L02和HepG2细胞6w,端粒结合蛋白TRF1、TRF2表达较对照组下调(P<0.05),核增殖抗原(PCNA)表达较对照组上调(P<0.05)。 结论:高浓度As2O3短期处理L02和HepG2细胞可诱导其凋亡。低浓度As2O3长期处理L02和HepG2细胞可导致细胞增殖及染色体畸变率增加。hTERT mRNA、端粒酶活性及端粒结合蛋白表达在此过程中的变化可能与细胞凋亡及增殖有关。
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