川楝素抗肉毒作用分子机制研究

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肉毒神经毒素(Botulinum neurotoxins, BoNTs,肉毒)是梭状肉毒芽孢杆菌分泌的毒蛋白,是世界上已知最强的生物毒素,包括A-G 7 个血清型,它的作用靶点主要在胆碱能神经肌肉接头的神经末梢,通过酶解在神经递质释放过程中起关键作用的SNARE 蛋白阻遏乙酰胆碱递质的释放,从而阻断神经肌肉接头的信号传递,使肌肉麻痹,并最终使动物呼吸衰竭致死。川楝素(Toosendanin, TSN, C30H38O11, FW 574)是一种从楝属植物韧皮部分离提取出来的含呋喃环的四环三萜类化合物,是传统驱蛔中药的有效成分。已有的研究表明,它是一种作用于突触前的特异性传递阻断剂,通过抑制神经递质释放阻断神经肌肉接头和中枢神经系统的兴奋传递。它在许多方面与肉毒作用相似,但同时又显示有效的抗肉毒效应。本文报告在首先重复了显示川楝素抗肉毒效应的在体实验后,利用蛋白电泳等方法研究了川楝素的抗肉毒作用机制,主要结果如下: 1)川楝素可使注射过致死剂量A 型肉毒的小鼠存活下来,并恢复正常活动; 2)川楝素孵育并不影响突触体的SNAP-25、syntaxin 及synaptobrevin/VAMP蛋白的量,但经川楝素预处理的突触体能完全抵抗A 型肉毒对其SNAP-25 蛋白的酶切; 3)经川楝素处理的突触体膜组分不能抵抗A 型肉毒轻链对SNAP-25 蛋白的直接酶切作用; 4)川楝素能抑制A 型和C 型肉毒与突触体的结合,作用是浓度依赖的,升高反应温度或者用高钾刺激增强突触活动后抑制作用更明显。
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