论文部分内容阅读
随着人们物质生活水平的不断提高和畜牧业的迅速发展,畜产品药物残留检测和食品安全评估方法研究倍受重视。喹乙醇是一种化学合成的抗菌促生长饲料添加剂,但不规范使用会产生蓄积毒性作用。该药属于禽类和鱼料的禁用品。因此,开展畜产品、饲料或饲料添加剂中喹乙醇含量检测和安全评价工作十分必要。目前喹乙醇常用的检测方法如HPLC等需依靠大型仪器,且大都存在样品前处理繁琐、费用高、检测时间长等缺陷。研究和开发快速检测技术对喹乙醇添加量的验检和监督具有重要意义。本论文采用人工合成抗原技术,利用制备的多克隆抗体初步建立了喹乙醇ELISA检测方法,旨在为喹乙醇快速检测提供相关技术。实验结果表明:采用TLC、熔点、红外、质谱、核磁共振法显示,实验合成的OLA结构衍生物OLA-HS符合设计结构,成功的在喹乙醇分子结构中2位的-OH基团位点上引入了-COOH;OLA-BSA、OLA-KLH、底物间的紫外图谱表明载体蛋白与底物间偶联成功,OLA-BSA偶联比为5.2:1, OLA-KLH的偶联比为7.8:1;用OLA-BSA免疫新西兰大白兔6次后,OLA-BSA特异性抗血清最高效价为128 000;实验建立OLA的ELISA检测方法中,应用方阵滴定法确定包被抗原、抗血清、酶标二抗的最佳工作浓度分别为10-3mg/ml、1:8000、1:10000;采用辛酸-硫酸铵法纯化抗血清后,最适工作浓度为1:2000时,在0.1～100μg/ml的浓度范围内喹乙醇浓度与抑制率存在较理想的线性关系,线性回归方程:I=12.313LogC+22.662(R2=0.9992),灵敏度为0.122μg/ml;抗体交叉实验中抗血清与OLA结构类似物喹胺醇间有一定的交叉反应,但抑制率明显低于OLA,抗血清与氯霉素和盐酸克仑间没有交叉反应性。本实验初步结论为:运用优化后的丁二酸酐法与活泼酯化法可成功合成出偶联比较高的目标抗原OLA-BSA和OLA-KLH;人工抗原OLA-BSA免疫动物后,可获得效价较高的抗血清,但与同类母体结构的化合物间呈现一定交叉反应,因此方法特异性有待提高。