荧光光度法在测定血清蛋白及药物中的应用

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蛋白质是生命活动的基础物质,建立蛋白质的快速简便的分析方法,对生命科学、临床诊断、药物及食品分析等都有着重要意义;药物分析是药物研究的重要组成部分,药学研究的不断发展对药物分析提出了越来越高的要求,建立灵敏、快速的药物分析方法已成为必然。荧光分析具有灵敏度高、选择性好、方法简便快捷等优点,在蛋白及药物定量分析中占据了极其重要的地位。本文主要应用了荧光分析法对牛血清白蛋白、人血清白蛋白、盐酸环丙沙星及苏丹红I进行了分析测定。论文分成四章:第一章:综述了荧光分析法在血清白蛋白及药物测定方面的研究进展。引用参考文献64篇。第二章:应用血清白蛋白对荧光素-Cu(Ⅱ)-CTMAB体系的荧光猝灭作用建立了检测血清自蛋白的新方法。当pH=9.4时,血清白蛋白能使荧光素-Cu(Ⅱ)-CTMAB(溴代十六烷基三甲基铵)体系的荧光大幅度猝灭。基于上述现象,建立了一种灵敏、快速、简便的检测血清白蛋白的新方法。在优化的条件下,荧光猝灭程度与牛血清白蛋白及人血清白蛋白分别在0.15~2.5 mg/L和0.1~2.0 mg/L范围内呈正比。牛血清白蛋白检出限为0.11 mg/L,人血清白蛋白检出限为0.08 mg/L。将该方法应用于实际血清样品中人血清白蛋白的测定,结果满意。六次平行测定相对标准偏差为:2.9%-3.7%。回收率为:92.5%-107.5%。第三章:通过利用盐酸环丙沙星与曙红及Cu(Ⅱ)形成三元配合物导致曙红-Cu(Ⅱ)配合物的荧光猝灭的现象测定了盐酸环丙沙星。在pH=8.2的Clark-Lubs缓冲溶液中,在Tween-20存在条件下,曙红、Cu(Ⅱ)、盐酸环丙沙星之间形成稳定的三元配合物从而导致曙红的荧光猝灭。在优化条件下,荧光猝灭程度与盐酸环丙沙星浓度在0.4~4.0 mg/L范围内成正比,检出限为0.11 mg/L。将该方法应用于盐酸环丙沙星片剂中盐酸环丙沙星含量的测定,六次平行测定相对标准偏差为:2.41%~3.72%,回收率为:89.6%~98.5,结果满意。第四章:研究了在乙醇介质中,于λexem=280/495 nm处,强荧光染料吖啶黄的荧光与苏丹红I的吸收光的等色性,苏丹红I能够有效吸收吖啶黄发出的荧光,使其荧光猝灭,依此建立了荧光测定苏丹红I的新方法。该方法快速简便,其线性范围为:1.5x10-6~3.5×10-5mol/L。用于辣椒、辣椒酱食品中痕量苏丹红I的测定,相对标准偏差为:0.8%~2.7%,回收率为:89.5%~109.0%,方法检出限为:6.4×10-7mol/L。
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